第一章工具酶精品PPT课件名师编辑PPT课件.ppt

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1、问题：下列关于限制性内切酶的表示方法中，正确的一项是（）A.Sau 3A I B.E.co R I C.hind III D.Sau 3A I问题：1.在序列5-CGAACATATGGAGT-3中含有一个6bp的II类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么？2.下面几种序列中你认为哪一个（哪些）最有可能是II类酶的识别序列：GAATCG 、AAATTT、GATATC、ACGGCA？为什么？3.如果DNA由5种不同的碱基组成，则一个识别4个碱基序列的限制性内切酶大概隔（）碱基对可进行一次切割 A.125 B.256 C.425 D.625 E.10564.如果DNA由5种不同的碱基组

2、成，则一个识别4碱基序列的限制内切酶大约可将1Mb的DNA切割成多少段？（）A.125 B.320 C.625 D.1050 E.1600Eco RI 37 退火4-7 5G-C-T-C-T-G-C-A-OH P-G-G-A-G 33C-G-A-G-P OH-A-C-G-T-C-C-T-C 55G-C-T-C-T-G-C-A-G-G-A-G 33C-G-A-G-A-C-G-T-C-C-T-C 5Pst I 37 退火4-7 OHP5G-C-T-C-T-G-C-A G-G-A-G 33C-G-A-G A-C-G-T-C-C-T-C 5 POHPvu II等产生的平头末端平头末端5G-C-T-C-

3、A-G-C-T-G-G-A-G 33C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C 5Pvu II 37 5G-C-T-C-A-G-OH P-C-T-G-G-A-G 33C-G-A-G-T-C-P OH-G-A-C-C-T-C 51 U 核酸内切酶的酶活性：在最佳反应条件下反应1 小时，完全水解1 g 标准DNA所需的酶量大部分II 型核酸内切酶需要相似的反应条件反应条件：待酶切的DNA样品 内切酶 反应缓冲液 温度37，12hr完成酶切，所需酶量由切割的DNA量决定限制酶作图限制酶作图(Restriction Mapping)基本原理基本原理1Kb Eco RI待检的待检的DNABam HI

4、15Kb6Kb5Kb10Kb9KbEBBH H EH H H H E+BEB6KbEH 4KbEB 5KbBH 4.9kb1.53.40.71.01.22.00.20.51.21.02.0Eco RIBam HIEco RI+Bam HI结论12.01.20.7B E BB结论21.2 2.00.7B E BB如何确定哪种结论正确？答：部分限制性酶切0.71.01.22.04.9Bam HI1.72.73.73.94.9 DNA连接酶不能够连接两条单链连接酶不能够连接两条单链DNA分子或分子或环化单链环化单链DNA。实际上，。实际上，DNA连接酶是封闭双螺旋连接酶是封闭双螺旋DNA骨架上的切口（骨架上的切口（nick）