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1、鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围:96T30ng/L-900ngL使用目的:本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中卵黄免疫球蛋白(IgY)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)水平。用纯化的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入卵黄免疫球蛋白(IgY),再与HRP标记的卵黄免疫球蛋白(IgY)抗体结合,形成抗体-抗原-酎标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP的的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的卵黄免
2、疫球蛋白(IgY)呈正相关。用酶标仪在45Onm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlXl瓶7终止液6ml1瓶2酶标试剂6mlXl瓶8标准品(1600ngL)0.5mlXl瓶3酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液1.5mlXl瓶4样品稀释液6mlXl瓶10说明书1份5显色剂A液6mll三11封板膜2张6显色剂B液6mlXl/瓶12密封袋1个标本要求1 .标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20C保存,但应避免反复冻融2 .不能检测含NaN3的样品,因N
3、aN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1 .标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。800ngL5号标准品I5l的原倍标准品加入1501标准品稀释液400ngL4号标准品150l的5号标准品加入150l标准品稀释液200ngL3号标准品150l的4号标准品加入150l标准品稀释液100ngZL2号标准品150l的3号标准品加入150l标准品稀释液50ngL1号标准品150l的2号标准品加入150l标准品稀释液2 .加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50I,待测
4、样品孔中先加样品稀释液40h然后再加待测样品10l(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酷标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3 .温育:用封板膜封板后置37C温育30分钟。4 .配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸储水30倍稀释后备用5 .洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6 .加酶:每孔加入酶标试剂50l,空白孔除外。7 .温育:操作同3o8洗涤:操作同5o9 .显色:每孔先加入显色剂A50l,再加入显色剂B50l,轻轻震荡混匀,37避光显色15分钟.10 .终止:每孔加终止液50I,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11 .测定:以空
5、白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结:准备试剂,样品和标准品1加入准备好的样品和标准品,37C反应30分钟:J:洗板5次,加入酶标试剂,37C反应30分钟洗板5次,加入显色液A、B,37C显色10分钟计算计算以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可
6、使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2 .浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3 .各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4 .请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(XnX5)。5 .封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6 .底物请避光保存。7 .严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8 .所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9 .本试剂不同批号组分不得混用。10 .如与英文说明书有异,以英文说明书为准。保存条件及有效期1 .试剂盒保存:2-8。2 .有效期:6个月