胃癌原发灶和区域淋巴结转移灶中锌指蛋白13血管内皮生长因子的表达及临床意义修改见批注！.docx

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1、批注A1J:修改见批注I胃癌原发灶和区域淋巴结转移灶中锌指蛋白139、血管内皮生长因子的表达及临床意义薛孝斌，刘刚2,任冬莉3西安市长安区医院普通外科工肿痛科工麻醉科3,陕西西安710100【通讯作者】刘刚，邮箱:【基金项目】陕西省卫生事金项目(2018D126)摘要：目的：研究锌指蛋白139(ZNFl39)、血管内皮生长因子(VEGF)在胃瘟原发灶和区域淋巴结转移灶中的表达差异及其临床意义方法，选择2019年2月至2020年8月在西安市长安区医院就诊的78例胃癌患者,共分离出78份癌组织和42份转移淋巴结组织，记录患者临床病理学特征。通过免疫组化法检测患者原发灶和区域淋巴结转移灶中ZNFl3

2、9、VEGF表达率，采用X原发灶中ZNFI39、VEGF表达与临床病理学特征的关系.结果S胃W；区域淋巴结转移让ZNFI39和VEGF表达率分别为78.57%、73.81%,明显高于其原发灶表达率隹L53.85%、50.00%,差异均有统计学意义(PVO.05)；胃癌患者原发灶中ZNFl39、VEGF表达率在不同肿瘤分化度、不同TNM分期、有无淋巴结转移患者间比次差异均有统计学意义(P0.05):经Spearman相关性分析结果显示，胃癌患或原发灶中ZNFI39、VEGF表达阳性率与肿瘤低分化、TNM高分期、淋巴结转移发生呈正相关(PUlUdVthCcD【c、i“ndifference3、zi

3、ncfingerprotein139(ZNFI39)andVascularentiothelialrowthfactor(VEGF)inprimaryRaStriCCanCerandregionallymphnodemetastasisanditsCIiniCalsignificance.Methods:FrOrnFebrUarV2019IoAUgUSl2020.78PaliCnlSWilhgaslricCUnCCrWCrCSCICCICdfromChanganDiStriClHKSPilalOfXian.AIOIalOf78CanCerIiSSUeSand42metasialicIYmDhn

4、ode【i&suesWereisolated,and【heCliniCoPathologiCalfealurcsOfIhCPaliCnlSWCrCrecorded.ImmUnohiSIOChCmiSIrYWaSUSCdIodeteciIheexpressionralesOfZNFI39andVEGFinDalienisDrimarYfocusandregionalIVmDhnodemetastasis,andehi-quaretetIhCrdalionshipbetweenIhCexpressionOfZNFl39andVEGFinprimaryfccuUndCliniccrMihNcizic

5、aIfe;MUrc、WaSanalyzedlhrouahSDeSrmanCOlTelationanalysi,Results:theexpressionratesofZN-139anlI(iiregionalI；nphiuhIcmetastasisofgastricCanCerWere78.57%and73.81%,restectivelv,WhiChWereSianifkanHVhigherIhanIhOSeinPrimaryRkus(53.85%and5().(X)%.respectively).WilhSignifiCanldifference(P0.()5).ThKexpression

6、ratesOfZNF139andVEGFinIheDrimarVfocusOfgaslricCanCerDatienISWereSignifiCanHVdifferentamongDatientSWithdifferenttumordifferentiation,differentTNMStageSandIymPhnodemelasasis(0.05).TheresuksOfSDearmanCorre山IiOnanalysisShoWedIhal【hePOSiIiVCraleOfZNF139andVEGFCXDrCSSioninDrimarYfocusOfHaSlriCCaIICerPaIiC

7、ntSWaSPoSiIiVelyCorrelaledWilhIoWdiffereniaionOfIUnK)r.highTNMSUIgeandIymPhnodemcaslasis(P5cm者33例；伴淋巴结转移者42例。L28曜纳入标准：患者为初次发病，1消确诊为胃腺痛：均行手术治疗H愿意配合术中病理组织留样：术前无抗肿瘤治疗既往史:研究与患者知悉同意，,排除标准：病情危肃者：伴其它部位恶性肿掩者：伴先天性疾病及心、肺、肝、肾等严重器质性障碍者：伴严重免疫系统疾病者，1.3方法1.3.1 _ZNF139、VEGF检测将分离组织的石蜡切片切为厚4.0m片的薄片，脱蜡后通过免疫组织化学染色法招标本染

8、色。首先用0.50%高锌酸钾浸泡水洗520分钟，再用1.0%草酸浸泡25分钟实现脱色（通过癌组织大小和镜下观察脱色度具体判定），脱色后对抗原热修复25分钟，招薄片至于30%H2?室温下孵育12分钟，柠檬酸钠伴高温促进抗原的修复，随后冷却IO分钟并清洗，使用小牛血封闭液封闭胃癌组织和转移淋巴结组织20分钟后清洗3次，每次两分钟。随后用兔抗人ZNF139单克隆抗体（美国Sigma公司提供）、鼠抗人VEGF单克隆抗体（上海长岛抗体诊断试剂有限公司）：均按说明书配比稀释，稀释后在4C环境下孵化一夜。清洗后37C环境下孵化二抗半小时。再用链霉亲和素-生物素复合物免疫组化剂孵育半小时，复温50分钟后用链赛

9、亲和素-生物素复合物免疫组化剂孵育0.50小时，二氨基联苯胺显色10分钟，苏木素再染色5分钟后清洗、脱水、固定封片即可镜下观察。1.3.2 染色观察结果判定标准细胞质或细胞核在镜下可见棕揭色颗粒物为ZNF139和VEGF表达阳性表现，其中YEGF主要集中在细胞质，打阳性细胞占比和染色强度用，J分级计分，及后综合判定表达是否是阳性。ZNF139和VEGF染色强度评价标准：无色、淡黄、棕黄、棕褐依次对应。分、1分、2分、3分.ZNF139表达阳性显色细胞所占比例计分标准：WI居、15%V占比W55%、55%占比W75%、75%依次记为1分、2分、3分、4分。VEGF表达阳性显色细胞所占比例计分标准

10、：10%、10占比W25%、26%5050依次记为O分、1分、2分、3分。ZWI39阳性判定标准：阳性细胞占比和染色强度评分相加为1分计为阴性，1分计为阳性。VEGF阳性判定标准：阳性细胞占比和染色强度评分和乘，。为阴性，21为阳性。1.54统计学方法应用SPSSl8.O统计学软件进行数据分析,计量资料以均数土标准差（2s/4W巳更改表示，计数塔料比较采用X检验；两变量不满足直线相关性分析条件空用Spesrman相关性分析，以P005为差异有统计学意义。2结果2.1日癌原发灶和区域淋巴结转移灶中ZNFl39和VEGF表达率比较胃癌区域淋巴结转移灶ZNFI39和VEGF表达率明显高于其在原发灶表

11、达率，差异均有统计学意义（V。05）,见表1,其中ZNFl39、VEGF免疫组化染色结果见图1和图2。表I胃癌原发灶和区域淋巴结转移灶中ZNFI39和VEGF表达率比较I例（）J组别例数ZNF139VEGF阳性阴性阳性阴性原发灯7842(53.85)36(46.15)39(5().(X)39(50.00)区域淋巴结转移灶4233(78.57)9(21.43)31(73.81)11(26.19)图IZNF139免疫组化染色（“PO图2VEGF免疫组化染色（x400）2.2胃癌癌组织ZNF139表达率与临床病理特征的关系一胃癌癌组织ZNFi39表达率与肿瘤分化度、TNM分期、淋巴结转移有关（P0.05）,见表2。表2胃癌腑组织ZNF139表达率与临床病理特征的关系比较例（）】工ZNFi39/变量例数P阴性（n=36）阳性（n=42）性别男442d（%）24（%）0.0200.888批注依2）:全部补充I3416（%）18(%)年龄50岁3115160.1030.74850岁472126分化程度高分化3021911.1540.001低分化481533TNM分期I、Il期39261313.206().001III期39IO29肿瘤大小5cm331320淋巴结转移是421230