高效液相色谱法测定甲硝唑的含量.ppt

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1、药剂综合实验须知药剂综合实验须知实验项目实验项目一一 高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量 二二 氨茶碱加样回收率实验氨茶碱加样回收率实验 三三 氨茶碱溶液稳定性实验氨茶碱溶液稳定性实验 四四 紫外分光光度计法测定氨茶碱含量紫外分光光度计法测定氨茶碱含量 五五 氨茶碱原料药稳定性实验氨茶碱原料药稳定性实验 六六 五味子散剂的制备五味子散剂的制备 七七 SODSOD的含量测定的含量测定 八八 芦丁的提取和鉴别芦丁的提取和鉴别 实验要求实验要求1 1课前认真预习课前认真预习，明确本次实验的目的、要求、内容、方，明确本次实验的目的、要求、内容、方法及步骤法及步骤2 2提前提前

2、5-10min5-10min进入实验室，检查实验所需物品是否齐全，进入实验室，检查实验所需物品是否齐全，做好实验准备工作做好实验准备工作。3 3实验时严肃认真实验时严肃认真，根据实验指导要求进行操作，仔细观，根据实验指导要求进行操作，仔细观察和记录，并进行独立思考，察和记录，并进行独立思考，按时完成实验内容和实验报按时完成实验内容和实验报告。告。4 4保持实验室安静保持实验室安静，实验时不得随意走动和谈笑。室内严，实验时不得随意走动和谈笑。室内严禁吸烟、不允许在实验室内接听手机禁吸烟、不允许在实验室内接听手机.5 5保持实验室清洁整齐保持实验室清洁整齐，书包、衣帽等应放在指定位置，书包、衣帽等

3、应放在指定位置，不能置于实验台上；一切实验用具用完后擦洗干净，放回不能置于实验台上；一切实验用具用完后擦洗干净，放回原处。原处。6 6爱护爱护实验室一切仪器设备，实验室一切仪器设备，珍惜珍惜药品及一切消耗用品药品及一切消耗用品(如如纱布、拭镜纸、载玻片等纱布、拭镜纸、载玻片等)，节约节约水、电。按操作规程使水、电。按操作规程使用显微镜、解剖镜等，使用前要检查，使用后要擦拭整理，用显微镜、解剖镜等，使用前要检查，使用后要擦拭整理，如发现损坏或故障应及时报告指导教师。如发现损坏或故障应及时报告指导教师。7 7实验完毕后，实验完毕后，值日生值日值日生值日。值日工作范围包括：关闭水、。值日工作范围包括

4、：关闭水、电、门、窗；检查仪器，显微镜是否完好；查看水池，实电、门、窗；检查仪器，显微镜是否完好；查看水池，实验台，桌椅，地面是否干净整齐；最后在值日生记录本上验台，桌椅，地面是否干净整齐；最后在值日生记录本上登记值日情况，再登记值日情况，再交于老师签字后方可离开。交于老师签字后方可离开。考核办法考核办法Y 实验习惯实验习惯1010：迟到迟到1 1次扣次扣1 1分，旷课一次扣分，旷课一次扣3 3分，值日生必须最后走，早走者扣分，值日生必须最后走，早走者扣1 1分。分。Y 预习报告预习报告10%10%：不能简单抄书，要学会总结归纳。不能简单抄书，要学会总结归纳。Y 实验报告实验报告2020：当堂

5、绘图，当堂绘图，当堂交报告，迟交报告者要扣分。当堂交报告，迟交报告者要扣分。Y 实验操作实验操作30%30%：要能独立完成实验；实验结果必须交老师检查；出现重大失误者要扣分要能独立完成实验；实验结果必须交老师检查；出现重大失误者要扣分Y 实验考试成绩实验考试成绩3030：操作操作10%10%，笔试，笔试20%20%Y迟到、早退、缺一次实验以上者或考试不及格者均不能得优秀，缺两次迟到、早退、缺一次实验以上者或考试不及格者均不能得优秀，缺两次实验的不能得良好，缺该课程实验的不能得良好，缺该课程1/31/3以上者或不参加实验考试者，均没有实以上者或不参加实验考试者，均没有实验成绩。验成绩。（1 1）

6、实验名称）实验名称（2 2）实验目的）实验目的（3 3）实验内容及步骤）实验内容及步骤（4 4）实验结果）实验结果 实验一实验一 高效液相色谱法测定高效液相色谱法测定 甲硝唑的含量甲硝唑的含量高效液相色谱仪的主要结构及功能简介高效液相色谱仪的主要结构及功能简介1.1.高压输液泵高压输液泵2.2.进样器进样器3.3.高效分离柱高效分离柱4.4.液相色谱检测器液相色谱检测器5.5.记录仪记录仪(1)高压输液泵高压输液泵主要部件之一，压力：主要部件之一，压力：15015035035010105 5 Pa Pa。注意排气泡：注意排气泡：purgepurge流速设置流速设置（2 2）进样器）进样器n样品

7、液吸取方法：上下反复抽取液体，速样品液吸取方法：上下反复抽取液体，速度稍快，直到肉眼看不见气泡为止，水平度稍快，直到肉眼看不见气泡为止，水平持进样针（液体吸取数量持进样针（液体吸取数量可多余可多余20L20L），），注入进样器。注入进样器。n进样器存在的两个位置：进样器存在的两个位置：loadload（右上）（右上）和和injectinject。(2)(2)高效分离柱高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，柱体为直型不锈钢管，C18C18柱柱标准内径及柱长为标准内径及柱长为4.64.6*150mm150mm或或4.64.6*250mm250mm，填料填料颗粒粒度颗粒粒度5m5m。色谱柱色谱柱pHpH值

8、范围不同：值范围不同：酸性柱、碱性柱、中性柱。酸性柱、碱性柱、中性柱。安装方向安装方向 柱温箱：保持温度稳定。柱温箱：保持温度稳定。(3)(3)液相色谱检测器液相色谱检测器a.a.紫外检测器紫外检测器 b.b.光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器c.c.示差折光检测器示差折光检测器d.d.荧光检测器荧光检测器e.e.电导检测器电导检测器 紫外检测器紫外检测器 紫外检测器对占物质总数紫外检测器对占物质总数约约80%80%的物质（有机和部分的物质（有机和部分无机物质）均可检测，既可测无机物质）均可检测，既可测190-350 nm190-350 nm范围的光吸收范围的光吸收变化，也可向可见光范围

9、变化，也可向可见光范围350-700 nm 350-700 nm 延伸。延伸。优点：应用最广，灵敏度高，线性范围宽。是高效液优点：应用最广，灵敏度高，线性范围宽。是高效液相色谱仪的相色谱仪的标准配置标准配置。它的最重要特征是对流动相的流速。它的最重要特征是对流动相的流速（脉冲）和温度变化不敏感，可用于（脉冲）和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱梯度洗脱。缺点：对缺点：对无紫外吸收的组分无紫外吸收的组分不响应，而对紫外吸收较不响应，而对紫外吸收较大的溶剂如大的溶剂如苯苯不能作流动相使用。不能作流动相使用。高效液相色谱的主要分离方法高效液相色谱的主要分离方法 液相色谱根据液相色谱根据固定相性质固定相性

10、质可分为以下几种：可分为以下几种：吸附色谱吸附色谱 (Adsorption Chromatography)(Adsorption Chromatography)键合相色谱键合相色谱（Bonded phase chromatographyBonded phase chromatography）离子交换色谱（离子交换色谱（Ion Exchanger Chromatogr.Ion Exchanger Chromatogr.）空间排阻色谱（空间排阻色谱（Size Exclusion Chromatogr.Size Exclusion Chromatogr.）亲合色谱（亲合色谱（Affinity Chr

11、omatographyAffinity Chromatography）在以上五种分离方式中，在以上五种分离方式中，反相键合相色谱反相键合相色谱应应用最广，因为它采用用最广，因为它采用醇醇水水或或腈腈水水体系作流动体系作流动相。纯水易得廉价，它的紫外吸收极小。在纯水相。纯水易得廉价，它的紫外吸收极小。在纯水中添加各种物质可改变流动相选择性。使用最广中添加各种物质可改变流动相选择性。使用最广的反相键合相是的反相键合相是十八烷基键合相十八烷基键合相，即让十八烷基，即让十八烷基（C18H37C18H37）键合到硅胶表面。这种键合相又称）键合到硅胶表面。这种键合相又称ODSODS（Octadecylsi

12、lylOctadecylsilyl）键合相，如国外的）键合相，如国外的partisil5-ODSpartisil5-ODS、Zorbax-ODSZorbax-ODS、Shim-pack CLC-Shim-pack CLC-ODSODS，国产的，国产的YWG-C18YWG-C18等。等。实验目的实验目的 熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能；熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能；了解反相色谱法的原理、优点和应用。了解反相色谱法的原理、优点和应用。了解流动相的选择依据及配制方法；了解流动相的选择依据及配制方法；掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的基掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的基 本方法

13、。本方法。实验原理实验原理 高效液相色谱法是采用高效液相色谱法是采用高压输液泵高压输液泵将规定的流动将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱信号。本实验以甲硝唑为测定对象，以信号。本实验以甲硝唑为测定对象，以反相反相HPLCHPLC来分来分离离检测未知样中甲硝唑的含量检测未知样中甲硝唑的含量。以甲硝唑标准系列溶。以甲硝唑标准系列溶液的色谱峰面积对

14、其浓度进行线性回归，再根据样品液的色谱峰面积对其浓度进行线性回归，再根据样品中甲硝唑的峰面积，由线性方程计算其浓度。中甲硝唑的峰面积，由线性方程计算其浓度。实验器材与材料实验器材与材料实验器材：实验器材：高效液相色谱仪、精密天平、高效液相色谱仪、精密天平、50ml50ml烧杯、玻璃棒、称量纸、烧杯、玻璃棒、称量纸、10ml10ml容量瓶、容量瓶、50ml50ml容容量瓶、注射器、洗瓶、量瓶、注射器、洗瓶、EPEP管、滤膜。管、滤膜。实验材料：实验材料：甲硝唑原料、蒸馏水、甲硝唑原料、蒸馏水、HClHCl、乙腈、乙腈、三氟乙酸、超纯水。三氟乙酸、超纯水。0.1M HCl0.1M HCl溶液配制：

15、溶液配制：准确量取准确量取HClHCl溶液溶液 8.3ml,8.3ml,用蒸馏水定容至用蒸馏水定容至1000ml1000ml，即得。，即得。实验步骤实验步骤 色谱操作条件色谱操作条件;标准溶液配制；标准溶液配制；标准曲线的建立；标准曲线的建立；样品溶液的配制；样品溶液的配制；甲硝唑样品含量测定。甲硝唑样品含量测定。色谱柱：色谱柱：C18C18柱（柱（1501504.6mm,4.6mm,5m5m）；）；流动相：乙腈：流动相：乙腈：0.02%0.02%三氟乙酸水溶液（三氟乙酸水溶液（2020：8080）流速：流速：1mL/min1mL/min 检测波长：检测波长：277nm277nm 柱温：柱温：

16、3535 进样量：进样量：20L20L1.1.色谱操作条件：色谱操作条件：2.2.标准溶液配制标准溶液配制 精密称取在精密称取在105105条件下干燥至恒重的条件下干燥至恒重的甲硝唑对照品甲硝唑对照品10mg10mg，置于，置于50mL50mL容量瓶中，用容量瓶中，用0.1M HCl0.1M HCl溶液溶解并定容至刻度，即得浓度溶液溶解并定容至刻度，即得浓度为为0.2mg/mL0.2mg/mL的甲硝唑标准储备液，备用。的甲硝唑标准储备液，备用。3 3、标准曲线的建立、标准曲线的建立 精密量取甲硝唑标准储备液分别为精密量取甲硝唑标准储备液分别为0.3ml0.3ml、0.5ml0.5ml、0.7ml0.7ml、0.9ml0.9ml、1.1ml1.1ml置于置于10ml10ml的容量的容量瓶中，然后用瓶中，然后用0.1M HCl0.1M HCl溶液定容至刻度，得到溶液定容至刻度，得到浓度梯度为浓度梯度为6g/mL6g/mL、10g/mL10g/mL、14g/mL14g/mL、18g/mL18g/mL和和22g/mL22g/mL的标准溶液，的标准溶液，分别过分别过0.22m0.22m的微孔滤膜