静脉注射加替沙星在家兔体内的药代动力学.ppt

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1、静脉注射加替沙星在家兔体内的药代动力学实验目的1.学会测定家兔血药浓度的方法2.掌握HPLC的使用3.掌握药代动力学参数的计算实验原理加替沙星为第三代喹诺酮类药物。喹诺酮类药物是一种DNA旋转酶抑制剂,它作用于细菌DNA旋转酶,干扰DNA超螺旋结构的解旋,从而阻碍DNA的复制,而呈现杀菌作用。该类药物的共同特点是:抗菌作用强大,抗菌谱较广,主要对抗革兰阴性菌,对革兰阳性菌也有相当作用。在体内的分布较广,可进入大多数药物不能进入的骨、关节和前列腺组织等。加替沙星在体内符合二房室模型实验材料与仪器1.1药物与试剂盐酸加替沙星。甲醇(色谱纯),醋酸铵,10%高氯酸溶液,重蒸水,均为分析纯试剂。实验材

2、料与仪器1.2动物健康家兔1只实验材料与仪器1.3仪器高效液相色谱仪旋涡混合器离心机手术器械实验方法2.1色谱条件色谱柱为ODS柱,流动相:水相为15mmol/L醋酸铵,醋酸调pH为3.0,有机相为乙腈。水相-有机相(78:22),流速1.0ml/min,检测波长为293nm,柱温为40。实验方法2.2样品的采集取健康家兔进行称重,麻醉,股动脉插管作取血用。将加替沙星注射液按每30mg/kg从耳缘静脉给药停止给药后分别于2,5,10,15,30,45,60,90,120min时进行血液采集,装入无菌微量离心管中。每次取血o.5ml,每管血液中加入1滴肝素抗凝。离心(4000r/min)15mi

3、n.取血浆0.2ml,备用。实验方法2.3.1 标准溶液配制称取100mg加替沙星标准品,加入100ml甲醇,配成1mg/L母液;用母液加甲醇。分别稀释成500,250,125,62.5,31.2,15.6,7.8,3.9ug/ml的标准溶液实验方法2.3.2 标准曲线取10ul标准溶液,加入90ul空白血浆,分别稀释成50,25,12.5,6.25,3.12,1.56,0.78,0.39ug/ml加 10%高氯酸溶液0.1ml,混匀,涡旋震荡3min,12000rpm离心10min取上清液120ul转移至另一离心管内,取20l 进样以加替沙星浓度C(g/ml)对相应峰面积A回归,得回归方程。

4、实验方法2.3.3 样品处理取兔血浆0.1ml,加 10%高氯酸溶液0.1ml,混匀,涡旋震荡3min,12000rpm离心10min取上清液120ul转移至另一离心管内,取20l 进样。计算加替沙星峰面积A,代入标准曲线求得各时间点的血药浓度。实验方法2.3.4用Kinetica 4.4计算药代动力学参数实验结果2.4.1.标准曲线实验结果实验结果2.4.2 血药浓度-时间曲线实验结果2.4.3 实验结果2.4.4 c-t图像(kinetica4.4自动生成,权重:1/c2,c为计算值)实验结果2.5.5 药代动力学参数讨论实验结果可得加替沙星在体内消除符合二房室模型,与文献相符。但求出的药

5、代动力学参数和文献有较大差异,原因可能是:1.给药剂量不一样,导致与剂量有关的参数不一样,如AUC,C0等。2.文献用的软件是3p87,我们用的是kinetica4.4.不同软件计算方法不一样,可能算出来的结果也不一样。3.拟合时可以选择不同的权重系数,权重系数有1,1/c,1/c2等。常用的有1和1/c2(kinetica还有测量值和计算值之分),不同权重系数的结果差异很大,没有可比性。因此可能有更合适的方法可以用来拟合。讨论此外,实验中的注意事项有:1.动物实验取血时要防止凝血,取血时间点要准确。2.用HPLC测定时,标准曲线和样品要在同一台仪器上测。3.每次进样量要固定。平行操作减少误差。4.色谱柱使用前要活化,更换流动相后要平衡30min-1h。实验结束后要用甲醇冲柱子。Thank you!

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