血型鉴定与交叉合血.ppt

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1、血型的定义及分类 血型是指各种血液成分的遗传多态性标记。血型抗原不仅存在于红细胞上,也存在于白细胞和血小板上，还存在于各种组织细胞、多数体液中，甚至不同个体的血清蛋白间也存在型别的差异。血型系统主要分类：1.红细胞血型系统，其中又分为ABO血型系统、Rh血型系统、MNS血型系统、P血型系统、Kell血型系统、Kidd血型系统、Duffy血型系统 2.人类主要组织相容性抗原系统（HLA)3.血小板血型系统（PHA）4.血清型。血清型按蛋白质可分为免疫球蛋白、血清酶、血清蛋白、补体等几大类。血型鉴定 血型鉴定主要用已知特异性的抗体鉴定未知的红细胞抗原，或辅助用已知抗原的一组红细胞（谱红细胞）鉴定未

2、知血清的抗体，结合相关理论基础综合判断血型。血型鉴定以抗原、抗体免疫检测技术为基础，常用的方法有盐水介质法、微柱凝胶卡片法、聚凝胺法，疑难血型还可用聚合酶链反应（PCR）技术直接分析相关血型的基因。1.1 ABO血型鉴定 实验原理：原理：根据红细胞上有或无A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。试剂和材料：1)抗-A(B型血)、抗-B(A型血)及抗-A+B(O型血）分

3、型血清，购置商品试剂。2)5A、B及O型试剂红细胞盐水悬液。3)受检者血清。4)受检者5红细胞盐水悬液。ABO血型鉴定的检测方法1.试管法 （1）取洁净小试管（内径10mm60mm)3支，分别标明抗-A、抗-B、抗-A+B,用滴管分别加抗-A、抗-B、抗-A+B分型血清各1滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5红细胞盐水悬液1滴，混和。（2）另取洁净小试管（内径10mm60mm)3支，分别标明A、B、O细胞,用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再以滴管分别加入5 A、B、O试剂红细胞盐水悬液1滴，混和。（3)立即以1000rmin离心lmin.（4）将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，

4、先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。（5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。4 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细 胞。1 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞 土 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞 MF 混合凝集外观(mixed field)是指镜下可见少 数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。一 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。5)凝集强度判断标准 2.玻片法 （1)取清洁玻

5、片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B、抗A+B,分别用滴管滴加抗-A、抗-B、抗-A+B分型血清1滴于标明的方格内，再各加受检者2红细胞悬液1滴，混和。（2)另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。（3)将玻片(或白瓷板)不断轻轻转动，使血清与红细胞充分混匀，连续约15min，以肉眼观察有无凝集(或溶血)反应。玻片作试验时，也应用低倍镜观察结果。4）结果判定 ABO血型正反定型结果 注释：十为凝集；一为不凝集。分型血清分型血清+受检者受检者RBC 受检者血型受检

6、者血型 受检者血清受检者血清+试剂试剂RBC 抗-A 抗-B 抗-A十B A细胞 B细胞 O细胞 十 十 A 十 十 十 B 十 一 O 十 十 十 十 十 AB 5）注意事项 （1）分型血清质量性能要符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。（2）试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤3次，以去除存在于红细胞表面的血清中成分及可溶性抗原。（3）试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。（4）操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。（5)按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温

7、(20-24)内进行试验，37可使反应减弱。（6)离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。（7)观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。（8)判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。正反定型结果不一致的原因 主要有以下三个方面：一、技术性方面问题 二、红细胞方面的问题 三、血清方面的问题 常见情况如下：1)分型血清效价太低、亲和力不强。若抗-A血清效价不高，可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。2)红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。3)受检者红细胞上抗原位点过少(如亚型、新生儿)或抗原性减弱(见于白血病或

8、恶性肿瘤）以及类B或cisAB等。4)受检者血清中蛋白紊乱(高球蛋白血症、高浓度的纤维蛋白原)，或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。5)受检者血清中缺乏应有的抗-A或抗-B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。6)各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体.7)由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集，往往是正反定型不符的原因。8)血清中有意外抗体，如自身抗-I，常引起干扰。9)老年人血清中抗体水平大幅度下降。正反定型结果不一致的解决办法 如发现ABO正反定型结果不一致，先要重复做试验1次。严格执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察和解释试验结果，就可解

9、决明显的问题，对一些疑难问题必须进一步按以下步骤进行研究。检查步骤 ：1)另从受检者采取l份新鲜血液标本，这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不符合。2)将红细胞洗涤数次，配成5盐水细胞悬液，用抗-A、抗-B、抗-AB、抗-A1及抗H做试验可以得到其它有用的信息。3)对受检红细胞作直接抗球蛋白试验,如结果呈阳性,表示红细胞已被抗体致敏。4)用A1、A2、B、O红细胞及自身红细胞检查受检血清。如果怀疑是抗-I，用O型(或ABO相合的)脐血红细胞检查。5)如果试验结果未见凝集，应将试验至少在室温和4放置30min，用显微镜检查核实。6)若疑为A抗原或B抗原减弱，将受检红细胞与抗-A或抗-B血清作吸收

10、及放散试验以及受检者唾液作A、B、H血型物质测定。后者只对80%HAB分泌型的人有用。7)若试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水l滴，混和，往往可使缗钱现象消失。应注意，不要先加盐水l滴于受检者血清中而后和红细胞作试验，以免使血清中抗体被稀释。8）若受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用下列方法进行鉴别：（1）观察细胞与抗-A及抗-B的凝集强度，与抗-A的反应要比与抗-B的反应强。这种区别用玻片法作试验更为明显。（2）用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗-B不凝集自身红细胞上的类B抗原。（3）检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质而无B物质。（4）核对患者的诊断，类B抗

11、原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关。9)如发现多凝集现象，应考虑由遗传产生的Cad抗原活性；被细菌酶激活的T或TK受体；或产生机制不太明了的Tn受体所引起。多凝集红细胞具有以下特点：能被人和许多家兔的血清凝集，不管有无相应的同种抗体。不被脐带血清凝集。通常不与自身的血清凝集。原理：用5种抗Rh分型血清抗-C、抗-c、抗-D、抗-E、抗-e 来检测红细胞抗原.在Rh血型系统中D抗原的抗原性最强，出现的频率最高,临床上影响最大，故临床上一般只鉴定D抗原。常用抗-D 血清来测定红细胞,凡带有D抗原者，称为Rh阳性，不带有D抗原者，称为Rh阴性。试剂：抗D血清(购买商品试剂)。操作：试管法

12、：取RhD(IgM)试剂50uL和5%受检者红细胞盐水悬液50uL，加入小试管内，摇匀，900g离心15秒，判定结果。同时做阴阳性对照。凝集(或溶血)反应为Rh阳性,无凝集(或溶血)反应，仅表明实验的红细胞缺少正常强度的D抗原，再用不同批号抗D血清做重复试验，如无凝集(或溶血)反应，不能轻率地报告Rh阴性，应做Du鉴定。1.2 Rh血型鉴定 注意事项：（1）Du 型人经输注D阳性红细胞后可产生抗D抗体，所以患者为Du 型应作Rh阴性论，应输注Rh阴性血液;供血者为Du 型，应作Rh阳性论，不应当输给Rh阴性患者。（2）Du 型妇女与Rh阳性丈夫生育的婴儿可以产生新生儿溶血病。（3）本实验不适合

13、于自身凝集的样本的检查，因自身凝集的样本容易引起假阳性。（4）对于检测为弱阳性和阴性的样本，应采用抗人球蛋白实验检测弱D抗原或不完全D抗原是否存在，同时做进一步的确认实验。交叉配血试验交叉配血试验 交叉配血试验又称不配合性试验，是确保患者安全输血必不可少的试验，完整操作规程应包括：1.查阅受血者以前的血型检查记录（包括Rh血型)；2.对收到的受血者样本做ABO正反定型和Rh定型；3.选择合格的血液作交叉配血试验。交叉配血的方法：（1）盐水介质配血法 （2）酶介质配血法 （3）抗人球蛋白配血法 （4）凝聚胺介质配血法 （5）微柱凝胶卡配血法 1.盐水介质配血法 标本处理:1)抽取受血者静脉血3-

14、4ml,待凝固后分离血清，并将红细胞配成2%盐水悬液。2)将供血者血样以同样方法分离血清，并将红细胞配成2%盐水悬液。操作 1)取洁净小试管两支，1支标明主侧（受血者血清供血者红细胞）；另1支标明次侧（供血者血清受血者红细胞）。2)按标记主侧管加受血者血清1滴，加供血者红细胞悬液1滴。次侧管加供血者血清1滴，加受血者红细胞悬液1滴，混匀，以1000r/min离心1min，轻轻侧动试管，观察结果。室温较低时，应将试管保温，以防冷凝集素引起的凝集反应。结果判断及报告：1)ABO同型配血,主侧和次侧均无溶血及凝集表示无输血禁忌，可以输血。2)两人值班时，交叉配血试验由两人互相核对；一人值班时，操作完

15、毕后自已复核，并填写配血试验结果。注意事项：1）受血者配血试验的血标本必须是输血前3天之内的。2)血库要逐项核对输血申请单、受血者和供血者血样，复查受血者和供血者ABO血型（正、反定型），并常规检查患者Rh（D）血型（急诊抢救患者紧急输血时Rh(D)检查可除外），正确无误时才可进行交叉配血。3)凡输注全血、浓缩红细胞、红细胞悬液、洗涤红细胞、冰冻红细胞、浓缩白细胞、手工分离浓缩血小板等患者，应进行交叉配血试验。机器单采浓缩血小板应ABO血型同型输注。4)凡遇有下列情况必须按全国临床检验操作规程有关规定作抗体筛选试验：交叉配血不合时；对有输血史、妊娠史或短期内需要接收多次输血者。2 改良离子交叉

16、配血试验原理 红细胞表面带有大量的负电荷，当红细胞悬浮在电解质溶液中时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引，此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕而形成Zeta电位，Zeta电位决定红细胞之间的相互排斥作用。凝聚胺技术首先利用低离子溶液降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合。其后再加入凝聚胺溶液，它是一种高价阳离子多聚物，肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝聚。最后加入悬浮液，具有中和凝聚胺阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，实验结果为阴性；但如果红细胞已被相应的抗体致敏，凝集就不会散开，实验结果为阳性。试剂组成:R1 低离子介质溶液（LIM），主要 成份（0.2%EDTA-Na2，5%葡萄糖）R2 凝聚胺溶液（Polybrene），主要成份（0.05%Polybrene，0.9%氯化钠）R3 悬浮液（Resuspending)，主要成份（3.5%柠檬酸三钠，1.5%葡萄糖）R4 阳性对照血清（含抗D血清，氯化钠及稳定剂)R5 抗人IgG