药典委员会凌大奎.ppt

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1、中国药典高效液相色谱法 主要分离机制有吸附、分配、离子交换、分子排阻、疏水、亲和等。一、色谱柱（一）微粒硅胶 正相色谱填料 吸附机制，具立体选择性，反相色谱填料基质（二）高分子微球 常用苯乙烯/=乙烯基苯共聚物 （PS-DVB）化学惰性好，pH使用范围宽（114）柱效低，溶胀率大 主要用于离子色谱和分子排阻色谱 （三）微粒多孔碳 完全非极性，是一种天然的“反相填料”机械强度差，柱效较低（四）键合硅胶 不同性质的键合基团可适 应不同的分离目的 硅胶的弱酸性 pH使用范围27.5 残留Si-OH 第二分离机制 封尾 进一步键合短链烷基、异丙基、叔丁基、极 性基因等 烷基（C18、C8、C2）、苯基

2、键合相，应用最广，占全部HPLC的85%以上。氰基键合相 分离特性与硅胶相似，但极性较弱，故不可逆吸附较少、平衡较快，对几何异构体或含不同数目双键的环状化合物分离效果好。氨基键合相 NH2呈碱性而硅胶呈弱酸性，用于正相色谱时两者的选择性不同，适用于各种糖的分离。包覆聚合物 提高化学稳定性，扩大pH使用范围。手性键合相 键合具有手性中心的不同类型的化合物 类型 化学组成 分离机制刷型（Pirkle）中性硅烷基 三点作用模型螺旋型聚合物 纤维素及其衍生物 插入型复合物立体空穴 环糊精及其衍生物 包合物配体交换 氨基酸与过渡金属络合物 金属络合物 蛋白质 -酸性糖蛋白 蛋白亲和 血清白蛋白 疏水作用

3、二、检测器 UV、F、DRI、EC、ELS、MS等1、UVD 固定波长、可变波长和DAD2、ECD 极谱、库仑、安培和电导检测器等 极谱、库仑和安培检测器适用于具有氧化/还原性质的化合物，在生命科学领域中应用较多，其中脉冲安培检测器可用于不经衍生化的氨基酸分析。电导检测器是离子色谱中的常用检测器。3、ELSD 利用散射光检测组分 I=Kmb lg I=b lgm+lgK 式中K和b为常数，与漂移管温度、雾化气体压力和流动相性质有关。三、数据处理系统（一）峰处理参数的正确设置 1、峰宽（WD）Wh/2WD被确认 2、最小峰面积 3、斜率 决定峰检测灵敏度和色谱峰的“起止点”，但实际基线的起止点通

4、常比“起止点”分别向外延伸1/4WD 4、飘移值 决定基线取割方式 完全分离峰 过二翼引公共切线 未完全分离峰 重叠部分作垂直切割 骑尾峰 顺主峰走势引切线或 结合垂直切割（二）色谱数据的再处理 1、是否存在多积或漏积的小峰 2、基线取割是否合理 3、分析结果是否满意四、系统适用性试验 考核色谱系统的分离效果是否满足分析对象的要求1、分离度 Rs=n/4（k/1+k）（-1/）Rs=2（t2t1）/W2+W1 或 Rs=2（t2t1）/1.70（W1，h/2+W2，h/2）Rs=1 二峰重叠2%Rs1.2 二峰完全分离2、柱效 n=16（t/w）2或n=5.54（t/wh/2）23、拖尾因子T

5、 0.95T1.05 仅指峰高法定量的要求4、重复进样响应值的RSD2%为保证分离效果，各色谱条件可在一定范围内适当调节pH（0.5），缓冲液浓度（10%），柱长（50%+100%），内径（25%），填料粒径（50%），流速（50%），柱温（10），检测波长（3nm），流动相组分比例（30%，对比例2%的小组分可增至2%，但不得10%），进样体积（精度和检测限可接受）。五、计算方法1、内标法2、外标法（对照品法）3、加校正因子的自身对照法（规定校正因子和相对保留时间）4、自身对照法 调节检测灵敏度 限度液峰高达满量程的1025%峰面积能准确积分 C（%）RSD（%）0.5 10 0.52 5

6、2 25、归一化法 原则上不采用有关杂质检查的若干技术要求一、概述 根据杂质来源，USP将其分为特定杂质（Specified Impurities）和非特定杂质（Unspecified Impurifies）杂质类型 ICH分类 USP技术要求 起始原料 副产物 特定杂质 有机 中间体 试剂、配位体、催化剂 降解产物 特定和非特定杂质 试剂、配位体、催化剂 特定杂质 无机 残留金属 重金属 无机盐 炽灼残渣残留溶剂 有机挥发性杂质二、杂质的安全性评价1、动物安全性试验2、已通过安全性评价的药品，其中所含的各杂质（数和量）也被认为安全3、文献资料支持4、统一的安全性阀值 药品的日最大摄入量 安全

7、性阀值原料药 2g 0.1%或1mg/天*2g 0.05%10mg 1.0或50ug/天*制剂 10100mg 0.5%或200ug/天*100mg2g 0.2%或2mg/天*2g 0.1%*根据实际摄入量，取较低者作为安全性阀值三、原料药的杂质检制1、定性鉴别 特定杂质 应归属 降解产物 尽可能归属2、已知杂质 根据安全性评价结果，规定限度 毒性较大者，即使含量小于0.1%也应控制3、未知杂质 凡含量超过0.1%者，均应控制其限度4、杂质总量四、制剂的杂质控制 符合下列情况之一者可不设置杂质检查 1、在制剂生产和货架期内不发生降解，或虽有降解但所产生的降解产物不超过0.1%者 2、来自原料药的杂质没有增加或增加速率不大于原料药自身的降解速率（小于原料药的杂质限度）五、复方制剂杂质检查的计算方法1、杂质的定性鉴别，至少应知道由哪个母体化合物降解而来2、如采用自身对照法，其含量应由母体化合物折算