人白细胞介素10（IL-10）酶联免疫分析（ELISA）.docx

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1、amekMOnIyuseforresearchForlifescience人甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)酶联免疫检测试剂盒使用说明书AE92321Hu使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理,来检测人甲胎蛋白异质体3(AFP-L3),只能用于研究用途，不得用于医学诊断。用途：用于人血清、血浆及相关液体样本中甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)测定。工作原理本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中人甲胎蛋白异质体3(AFPT3)水平。向预先包被了人甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)单克隆抗体的酶标孔中加入人甲胎蛋白异质体3(AFP-L3),温育

2、；温育后，加入生物素标记的抗AFP-L3抗体。再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B,产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)的浓度呈正相关。试剂盒组成试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1个1个酶标包被板1X481962-8C保存标准品128ngml0.5mlX1瓶0.5ml1瓶2.8保存标准品稀释液3mlXl瓶6mlX1瓶2-8保存链霉亲和素-HRP3ml1瓶6ml1瓶2-8保存生物素标记的抗FP-L3抗体0.5mlXl瓶1mll瓶

3、2-8C保存显色剂A液3ml1瓶6ml1瓶2-8保存显色剂B液3ml1瓶6ml1瓶2-8保存终止液3mlXl瓶6mlXl瓶2-8保存浓缩洗涤液(20mlX20倍)Xl瓶(20mlX30倍)Xl瓶2-8C保存需要而未提供的试剂和器材1 .37C恒温箱。2 .标准规格酶标仪。3 .精密移液器及一次性吸头4 .蒸储水，5 .一次性试管6 .吸水纸注意事项1 .从2-8C取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2 .各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差3 .严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

4、4 .为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。5 .不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。6 .底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。洗板方法手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35Inl注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中标本要求1 .不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。2 .标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于

5、-20保存，但应避免反复冻融。操作程序1 .标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。）64ngml5号标准品120u1的原倍标准品加入120u1标准品稀释液32ngml4号标准品120Ul的5号标准品加入120u1标准品稀释液16ngml3号标准品120u1的4号标准品加入120UI标准品稀释液8ngml2号标准品120Ul的3号标准品加入120u1标准品稀释液4ngml1号标准品120Ul的2号标准品加入120u1标准品稀释液2 .根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的

6、尽量做复孔。3 .加样：D空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗AFPT3抗体，链霉亲和素-HRP,只加显色剂A&B和终止液，其余各步操作相同;2）标准品孔：加入标准品50UL链霉亲和素-HRP50ul（标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加）；3）待测样品孔：加入样本40ul,然后各加入抗AFP-L3抗体IOuh链霉亲和素-HRP50ul,盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37温育60分钟。4 .配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸储水30倍稀释后备用。5 .洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6 .显色：每孔先加入显色剂A50ul,再加入显色剂B

7、50ul,轻轻震荡混匀，37避光显色15分钟.7 .终止：每孔加终止液50Ul,终止反应（此时蓝色立转黄色）。8 .测定：以空白空调零，45Onln波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后10分钟以内进行。9 .根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。操作程序总结:试剂盒性能：1 .样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。2 .批内与批间应分别小于9%和15%检测范围：检测范围：0ngml-64ngml保存条件及有效期：保存：2-8。有效期：6个月（2-8）。Human

8、AFP-L3ELISAKitInstructionThiskitisonlyforscientificresearch,andshallnotbeusedasaclinicaldiagnosisofuse.PurposeThiskitallowsforthedeterminationofAFP-L3concentrationsinHumanserum,cellculturesupernatant,andotherbiologicalfluids.PrincipleThekitassayHumanAFP-L3levelinthesample,addHumanAFP-L3antibodytomic

9、rotiterplatewells,afterlncubating,addBiotinylatedanti-AFP-L3-antibody,thenCombinedStreptavidin-HRP,becomecomplex,afterIncubatingandwashingCompletely,AddTMBsubstratesolution,TMBsubstratebecomesbluecolor,reactionisterminatedbytheadditionofasulphuricacidsolutionandthecolorchangeismeasuredSpectrophotome

10、tricallyatawavelengthof450nm.TheconcentrationofAFP-L3inthesamplesisthendeterminedbycomparingtheO.D.ofthesamplestothestandardcurve.MaterialsprovidedwiththekitMaterialsprovidedwiththekit48determinations96determinationsStorageUsermanual11Closureplatemembrane22Sealedbags11Microelisastripplate112-8CStand

11、ard：I28ngmi0.5ml1bottle0.5ml1bottle2-8Standarddiluent3ml1bottle6ml1bottle2-8Streptavidin-HRP3ml1bottle6ml1bottle2-8Biotinylatedanti-AFP-L3-antibody0.5ml1bottle1ml1bottle2-8ChromogenSolutionA3ml1bottle6ml1bottle2-8ChromogenSolutionB3ml1bottle6ml1bottle2-8StopSolution3ml1bottle6ml1bottle2-8washsolutio

12、n(20ml20fold)Ibottle(20ml30fold)Ibottle2-8Materialsrequiredbutnotsupplied1. 37incubator2. Standardmicroplatereader(450nm)3. PrecisionpipettesandDisposablepipettetips.4. deionizedwater.5. Disposablelesttube6. AbsorbentpaperImportantnotes1. Thekittakesoutfromtherefrigerationenvironmentshouldbebalanced

13、15-30minutesintheroomtemperature,ELISAplatescoatedifhasnotuseupafteropened,theplateshouldbestoredinSealedbag.2. addSamplewithsamplerEachstep,Andproofreaditsaccuracyfrequently,avoidstheexperimentalerror.3. Pleaseaccordingtouseinstructionstrictly,Thetestresultdeterminationmusttakethemicrotiterplaterea

14、derasastandard.4. UsenewdisposalplasticpipettetipsandClosureplatemembraneforeachstandard,inordertoavoidcrosscontamination.5. Donotmixreagentswiththosefromotherlots.6. Thesubstrateevadethelightpreservation.Specimenrequirements1. extractassoonaspossibleafterSpecimencollection,andaccordingtotherelevant

15、literature,andshouldbeexperimentassoonaspossibleaftertheextraction.Ifitcant,specimencanbekeptin-20topreserve,Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.2. CantdetectthesamplewhichcontainNaN3,becauseNaN3inhibitsHRPactive.Assayprocedure1.Diluteandaddsample:DiluteOriginaldensityStandardasfollowtable:64ngml5StandardI2lOriginaldens