肌酸激酶(CK)测定标准操作规程.docx

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1、肌酸激酶(CK)测定标准操作规程1.检验原理:(酶学速率法)采用酶偶联反应测定肌酸激酶的活性浓度。磷酸计算和腺甘-5-二磷酸二钠(ADP)在肌酸激酶作用下,生成肌酸和腺甘-5-三磷酸二钠(ATP)oATP和葡萄糖在己糖激酶(HK)催化下,生成6-磷酸葡萄糖(G6P).G6P在葡萄糖-6磷酸脱氢酶(G6PDH)作用下脱氢,同时使氧化型辅酶I(Z)还原成还原型辅酶I(NADH),后者引起340nm吸光度的增高。在340nm检测NADH的生成量,即可计算出肌酸激酶的活性浓度。磷酸肌酸+ADP喇逊肌酸+ATPATP+葡萄糖一ADP+6-磷酸葡萄糖6磷酸葡萄糖+N4O+g6pdh6-磷酸葡萄糖+NADH

2、+-2.试剂主要组成成分组成成分浓度Rl咪嗖缓冲液(pH6.7)1OOmmo1/LN-乙酰半胱氨酸20mmolL烟酰胺腺喋口令二核甘酸磷酸3mmolL腺喋吟核糖核甘酸10mmolL二磷酸腺甘3mmolLD-葡萄糖30mmolL醋酸镁20mmolL己糖激酶2000U/LR2咪嗖缓冲液(dH8.7)1OOmmo1/L磷酸肌酸30mmolL葡萄糖-6-磷酸脱氢酶2000U/L二腺昔-5-磷酸锂IOumo1/L3.样本要求:静脉采血。新鲜无溶血血清。在2225可保存4小时,28保812小时,-20可保存34天。样本应避免反复冻融。4.检验方法;仪器法(详见DF-603DI-600标准操作规程)5参考范

3、围:样本参考范围(U/L)血清男性38-174女性26-1406.检验结果的解释:6.1 样本含量超出线性范围时,建议用O.9%(WV)的氯化钠溶液稀释样本。6. 2.单位换算:ukatL=UL16.67W36 .3当样本浓度较大时提高稀释倍数,建议最大稀释不超过10倍。7 .检验方法的局限性7.1 结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。7. 2若试剂浑浊,或以水空白在340nm处吸光度大于0.05时不能使用。7. 3检验结果仅供参考,不作为临床诊断唯一依据。8.产品性能指标8.1 空白吸光度:在37、34Onm波长,光径ICm时,空白吸光度AWO.05。8. 2试剂空白吸光度变

4、化率:在37、34Onm波长,光径ICm时,用生理盐水作为样品加入试剂测试时AminWO.002.8 .3分析灵敏度:在340nm处,光径ICnI时,测定1U/L的肌酸激酶时,吸光度变化AULmin2L25IO49 .4线性区间:试剂的线性区间为25T000UL,在此线性区间内:a)线性相关系数r应不小于0.9900;b)25T00UL区间内,线性绝对偏差不超过土10ULo101T000UL区间内,线性相对偏差不超过10%。8. 5精密度8.5. 1重复性:CV5%8. 5.2批间差:R10%8. 6准确度:相对偏差应不大于10%。8. 7干扰试验干扰物浓度(gL)是否有干扰抗坏血酸0.3无明显干扰脂血2.5无明显干扰胆红素0.4无明显干扰血红蛋白5.0无明显干扰无明显干扰:添加干扰物后的测定值与初始测定值的相对偏差处于10%以内。9临床意义:人类免疫缺CK以及CK同工酶活性测定用作心肌梗死以及心肌病的诊断如进行性杜兴氏肌营养不良的诊断及监测。随着心肌损伤,例如:出现急性心肌梗死,CK从损伤的心肌细胞中释放。早期病例中在梗死后4小时左右,即可发现CK活性升高。在1224小时达到高峰,34天后降至正常范围。

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