梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程.docx

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1、梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程1.试验方法：凝集法2 .检验原理：本品是将梅毒螺旋体(NiChOlS株)的精制菌体成分包被在人工载体明胶粒子上。这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体看体进行反应凝集，产生粒子凝集反应(ParticleAgglutinationTCSt,PA法)，由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体，并且可用来测定抗体效价。3 .样本要求3.1 样品中如果存在红细胞等其他有形成分，会给反应带来不便，所以应在离心除去之后再进行检查。3. 2血清样品即使钝化也不会影响检查结果。4检验方法4. 1方法一(参考表1)1)用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应杯第一孔中，共计4滴(1

2、00ul),从第2孔至第4孔各滴1滴(25ul)。2)用微量移液管取样品25ul至第一孔中，然后用微量加样器或微量移液管以2的方式从第一孔稀释至第4孔。3)用试剂盒中提供的滴管在第3孔中滴入(25ul)未致敏粒子，在第4孔中滴入一滴(25ul)致敏粒子。4)用平板混合器以不会导致微量反应杯内容物溅出的强度混合30秒钟，加盖后于室温(15-30oC)下水平静置。2小时后，在观察镜上记录并观察其反应图像，或者利用免疫稀释判定装置进行测定，另外，即使静置至次日也不影响判定结果。表11234血清稀释液斗）025样品样品稀释倍数1：5a1：11:201：40未致敏粒子(Ul)25致敏粒子(ul)25最终

3、稀释倍数1：401:80进行混合，盖上盖后静置反应2个小时判定在方法一中判定为阳性的样品，请再用具有确定意义的方法二进行检测。5. 2方法二（参考表2）1）用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应杯第一孔中，共计4滴（100ul）,从第2孔至第4孔各滴1滴（25ul）o2）用微量移液管取样品25ul至第一孔中，然后用微量加样器或微量移液管以2的方式从第一孔稀释至最后一孔。3）用试剂盒中提供的滴管在第3孔中滴入（25ul）未致敏粒子，在第4孔至最后一孔各滴入一滴（25ul）致敏粒子。4）用平板混合器以不会导致微量反应杯内容物溅出的强度混合30秒钟，加盖后于室温（15-30oC）下水平静置。2小时后，在

4、观察镜上记录并观察其反应图像，或者利用免疫稀释判定装置进行测定，另外，即使静置至次日也不影响判定结果。表21234567891011血清稀释12r222222225液(ul)0051515?51515155151住样品或阳卜kkk广性比对血清5555555、5、5、5、(ul)样品稀释倍数1:51:101:21:401:801:161:321:6401:1281:2561:512000000未致敏粒子25(ul)致敏粒子（UI）2525252525252525最终稀释倍数1：1:801:161:321:641:1281:2561:5121:1024400000000进行7昆合，盖上盖后静置反应

5、2个小时判定4.3对照试验1）能够确认每例样品未致敏粒子的反应（最终稀释倍数1：40）均是（一）2）能够确认每次检查中血清稀释液和致敏粒子以及未致敏粒子的反应均是（一）（介质对照）。3）每个试剂盒中的阳性对照血清都要与样品用相同的测定方法进行试验。阳性对照血清调制成抗体效价1：320（最终稀释倍数）。4. 4吸收操作对于未致敏粒子和致敏粒子均显示（土）以上凝集的样品，要按照下列顺序在完成吸收操作的基础上进行再试验.1）取用定量的溶解液调制好的未致敏粒子0.95ml至小试管中。2）加入样品50UI混合，于室温（15-30oC）下放置20分钟以上。3）离心分离（200OrPm5分钟），然后分取上清

6、液吸收完毕的稀释样品（1：20）50ul至反应板第3孔中，特别注意不要混入粒子。4）从第4孔以后，要预先各滴入25ul血清稀释液，从第3孔至最后一孔用微量加样器或微量移液管以2的方式稀释。之后就与检验方法2-3）以后同样的操作进行判定。通常情况可以用上述的吸收操作吸收完全，但如果吸收不尽时，请使用其他的检查方法。5检验结果的解释5. 1反应图像的判定在判定用观察板上静置微量反应板，观察粒子的反应图像。将反应图像与介质对照的图像进行比较，并参照表3进行判断。表3反应图像判定粒子呈纽扣状聚集，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形(一)精子形成小环状，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形(+)粒子环明显变大，其

7、外周边缘也不均匀且杂乱地凝集在周围(+)产生均一的聚集，凝集粒子在底部整体上呈膜状延展(+)6. 2判定基准阳性：未致敏粒子（最终稀释倍数1：40）的反应图像判定为（一），致敏粒子（最终稀释倍数1：80以上）的反应图像判定为（+）时，最终判定为阳性，进行方法2的测定时，将显示出反应图像为（+）时的最终稀释倍数作为抗体效价。阴性：无论未致敏粒子呈现何种反应图像，只要致敏粒子（最终稀释倍数1：80）的反应图像显示为（一）时，最终判定即为阴性。保留：未致敏粒子（最终稀释倍数1：40）的反应图像判定为（一），且致敏粒子（最终稀释倍数1：80）的反应图像显示为（）时，最终判定为保留。注）：通过本世纪判定

8、为抗体阳性或保留时，经过一段时间再进行检查要进行经时检查并与其他的检查结果和临床症状结合起来加以综合判断。6检验方法的局限性6.1 由于抗原、抗体反应的血清学试验方法的检测灵敏度具有一定的局限性,所以本试剂检测结果只能提示血清或血浆中有无梅毒螺旋体抗体存在，而不能作为临床诊断的唯一标准。7. 2抗体测试阴性的样品并不能排除梅毒感染的可能。7产品性能指标7.1 特异性试验自存标准样品按规定进行试验时，阳性标准样品的抗体效价相对于标准值在1管以内，阴性标准样品在1：80（最终稀释倍数）下不会显示凝集图像。8. 2灵敏度试验试剂盒中带有的阳性对照血清按规定进行试验时，抗体效价相对于标准值（最终稀释倍数1：320）在1管以内。7. 3重复性试验对同一样品（最终稀释倍数L160以上）重复进行5次测定，各抗体效价最大频数在1管以内。8. 4相关性取样品391例，研究它们和对照品（间接红细胞凝集反应）的一致率，结果如下所示：样品例数n=391例士1管以内一致率100%8注意事项8.1致敏粒子以及未致敏粒子在使用之前均应该混合均匀后再使用.8. 2微量反应板中的内容物充分混合后再静置。9. 3反应静置过程中，一定要对微量反应板加盖并禁止振摇。