龙牙百合脱毒试管苗低成本繁育技术规程.docx

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1、龙牙百合脱毒试管苗低成本繁育技术规程1范围本标准规定了龙牙百合（LiliIUnbroWnii7ar.viridulumBaker）脱毒种苗低成本繁育技术的术语和定义、外植体选择、培养基制备、诱导培养、增殖培养和瓶外生根的技术。本文件适用于龙牙百合脱毒试管苗低成本生产。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。DB15/T1611-2019细叶百合组织培养技术规程3术语与定义龙牙百合CLiliiifnbrowniiVar.viridulumBaker）是百合科百合属

2、多年生草本球根植物，是我国人工栽培的三大食用百合之一，其鳞片富含淀粉、蛋白质和脂肪，具有养阴润肺、止咳、清热、安神和利尿的功效。下列术语和定义适用于本标准。3.1接种在无菌条件下，将表面灭菌后的外植体或继代培养、增殖培养和生根培养的组培材料接入培养基的过程。3.2诱导培养将采集的外植体对其表面灭菌后接种，将其置于适宜条件下，启动生长、获得最初无菌培养材料的过程。3.3增殖培养将诱导出来的无菌材料接种，将其置于适宜条件下，使其形成丛生芽（苗）的过程。3.4瓶外生根法以无根组培苗为材料，直接种植在合适的基质中使其生根的方法。4外植体消毒与选择1.1 外植体消毒以脱毒龙牙百合商品球为外植体，将种球从

3、外至里剥下所有鳞片，放入IL大烧杯中，自来水下流水冲洗30min,之后用蒸储水洗IOmin；在超净工作台上,用已经配制好的0.1%Hgcl2中再浸泡消毒IOmin,再无菌水冲洗3-5次，每次冲洗5min,最后使用无菌滤纸吸干鳞片表面的水分。4. 2外植体选择将消毒完成的龙牙百合鳞片从中部横切，分成上下两段，备用。5培养基制备5.1培养基配方5.1.1 诱导培养基：MS+L0mgL6-BA+0.5mgLNAA+食用白砂糖30gL+X脂7gL,调整PH为5.8。5.1.2 增殖培养基：”5+1.00/1.6个人+0.1018/1.岫人+食用白砂糖308/1脂78人，调整PH为5.8。5. 2培养基

4、母液及培养基配制按照DB15/T1611-2019执行。5. 3培养基灭菌及保存将封口好的培养瓶尽快放入高压灭菌锅内，121灭菌1520min.灭菌完成后，切断电源，待灭菌锅内气压表降至。时再打开高压灭菌锅，取出培养基，并置于接种室冷却。灭菌后的培养基，贮存时间不超过10d05.4培养条件培养温度251C,光照强度2500Lx,每天光照时间Io-12h。6龙牙百合脱毒试管苗低成本生产技术6. 1无菌接种1.1.1 提前打开超净工作台的风机和紫外灯，通风15min.1.1.2 首先将接种工具用酒精棉擦拭,然后置入已完成预热的电热消毒器中消毒Imin,取出冷却后备用。1.1.3 将消毒和处理完成的

5、鳞片，接入培养基，每瓶接2-4个外植体，分布均匀，封好瓶口后，注明代号及日期等，放至培养室培养。6. 2诱导培养将已消毒的鳞片接种至诱导培养基上，接种后15-2Od时，在鳞片切口位置，萌出不定芽，上端鳞片的不定芽萌发数量和速度均优于下端鳞片；接种40d时，鳞片切口处不定芽数量多且生长健壮，并开始抽生新叶，叶片呈新绿色。7. 3增殖培养在超净工作台上，将已经诱导培养出来的丛生芽切成单芽，接种到增殖培养基中进行培养，每瓶接种2-4个单芽，接种20d左右时，单芽逐渐长成丛芽；接种40d后在丛生芽形成小鳞茎，数量多，且长势旺盛。6.4瓶外生根培养以清洁的河沙为基质，用1-2%。高锌酸钾溶液对基质进行消毒处理，种植前再使用0.1%多菌灵溶液喷施基质表面，覆膜保持适宜的湿度。当龙牙百合无根苗的小鳞茎直径大于Icm时，置于无强烈直射光的炼苗室内进行炼苗，4d后，将组培苗从瓶内取出，洗净残留的培养基，在300mgLNAA溶液中浸泡15min后，移栽到基质中，湿度控制在80%-90%,移栽温度以20-25C为宜，并适度遮阴，30天后生根多且健壮。6.5移栽将有3-4片真叶的幼苗进行移栽，混合基质为珍珠岩:蛭石:泥炭土=1：1：1,环境湿度控制在80%-90%,温度以20-25C为宜，并适度遮阴；移栽2周后，幼苗渡过缓苗期，每周喷施一次1/2MS培养基溶液，促进幼苗生长。