野生哺乳动物遗传多样性监测的DNA样本采集技术规范.docx

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1、野生哺乳动物遗传多样性监测的DNA样本采集技术规范1范围本标准规定了野生哺乳动物遗传多样性监测的DNA样本采集的采集方法、采集工具及材料、采集种类与数量、采集注意事项、存贮和运输注意事项。本标准适用于野生哺乳动物遗传多样性监测的DNA样本采集。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。HJ628-2011生物遗传资源采集技术规范（试行）NY/T541-2016兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范3采集方法3. 1非损伤性取样nonTnvasiveSamPling在不

2、捕获甚至不看到动物的情况下，通过收集脱落的毛发、羽毛、粪便、食物残渣、卵壳、蛹壳等样品的取样方法。本取样方法的优点在于几乎完全不会对动物造成影响且风险极小，缺点是本取样方法获得的样本往往质量不高，且样本质量会随着时间推移持续下降，会对后续实验造成影响。因此本取样方法建议 用，可以结 踪、样线 等技术方 集（征求意见稿）尽量在冬天使合足迹链跟法、大样方法法进行样本采3.2非伤起草单位：XX省濒危野生动物救护繁育中心害性取样联系人：李天芳电子信箱：non-destructivesampIing通过捕获动物来采集血液、毛发、羽毛、鳞片、脚趾等组织、不对其生理机能产生重大影响的取样方法。本取样方法的优

3、点在于可以在获得高质量样本的同时减小对动物个体的伤害，缺点是使用本方法采样时通常需要对动物进行捕捉、麻醉、放归等环节，需要耗费更多的人力物力、冒更大的风险，且可能对动物种群造成一定的影响如导致其对人的攻击性增强等。因此本取样方法仅建议对远离种群中心群体的游离个体进行使用，且在使用过程中一定要保证相关人员的人身安全。3.3伤害性取样destructivesampIing通过严重伤害甚至杀死动物而获得新鲜肌肉、器官等组织样品的取样方法。木取样方法的优点在于可以得到较高质量的样本，缺点是会杀死动物或对动物的生理机能造成极大伤害，被取样动物基本无法存活。因此本取样方法仅建议在年龄较大、身体较虚弱或基本

4、已经丧失繁殖能力的个体上使用以避免对野生动物种群造成过大的伤害。4采集工具及材料4.1 捕捉工具捕捉工具包括：捕捉网、自制陷阱和麻醉枪（针）等，应根据采集对象进行选择。麻醉药物可使用复合麻醉剂静松痛（氯胺酮与隆朋1:1复合剂），麻醉药解药可以使用育亨宾和“705”以1:1配比的复合剂，用药剂量应根据动物物种与体重的不同通过查阅相关文献进行调整。4.2 处理器材处理器材包括：剪刀（医用级或科学级）、解剖刀、锻子、带帽塑料试管（或离心管）、带帽广口瓶、滴管、封口塑料袋、锡箔盒、乳胶手套、手摇离心机等。器材应事先洗净并消毒，避免样本污染和传染疾病。4.3 记录工具记录工具包括：记号笔、标签纸、铅笔等

5、。4.4 处理和贮存材料处理和贮存材料包括：蒸播水、液氮、干冰、冰盒、冰袋、90%T00%乙醇、DNA缓冲液、血液抗凝剂等。5采集种类与数量5.1 动物组织哺乳动物组织样本一般采集动物的耳缘组织或趾，依据动物种类及大小进行选择，通常重量达到20Omg即可满足检测检验要求。5.2 动物血液哺乳动物最常见的采血部位包括颈静脉、大隐静脉、头静脉和股静脉。活体动物血液采集量应小于其体重的1%,以防止对其生长、繁殖、活动产生影响，通常50Ul即可满足监测检验需求。5.3 动物粪便动物粪便是动物的大肠排遗物，由于从粪便中遗传信息对动物本身无影响，在采集时应采集整体粪球各部位足量新鲜的为宜。5.4 动物毛发

6、由于从脱落的毛发中可提取遗传信息且采集样本对动物本身无影响，在采集时应尽量尽可能多的采集。6采集注意事项6.1 动物组织采集注意事项对活体动物进行采样时，在麻醉后使用适当的约束装置，以保护动物和处理者，防止动物突然苏醒或在神志不清是对操作人员进行攻击。采集的组织用蒸储水清洗晾干后放入含有能够没过它的95%乙醇溶液或DNA缓冲液的离心管中保存（固液体积比通常为1:10）,以防止遗传物质自然降解。6.2 动物血液采集注意事项采血前应用蒸储水或酒精清洁采血部位。采集后血液可置于加入了血液抗凝剂的带帽试管或离心管中，防止血液凝固影响下一步实验。6.3 动物粪便采集注意事项（1）冬季采集时要将整块粪便装

7、入封口袋（带一次性手套或套取样袋抓取），注意在采集过程中尽量不要对粪便表面粘膜产生破坏，避免将遗传物质破坏。（2）非冬季采集时依据物种不同将粪便尾部切下或逐粒装入装有变色硅胶颗粒的离心管或封口塑料袋中密封，其余部分用信封保存，以避免湿润环境下微生物生长破坏遗传物质。（3）每次采集时都使用新的一次性手套，防止样本污染。6.4 动物毛发采集注意事项毛发样本可在用蒸储水冲去表面脏物后直接放入离心管或封口塑料袋中保存，避免细小样本遗失。6.5 样本采集中防疫注意事项进入感染或可能感染和无害化处理地点，应穿防护服、戴橡胶手套、口革、护目镜、穿胶鞋，防止疫病感染。离开感染或可能感染和无害化处理地点，应做如

8、下处理：（1）应先脱去个人防护装备再脱手套；（2）脱个人防护设备时，污染物要装入熟料带内，置于指定地点；（3）将脱掉的防护装备置于容器内进行消毒。6.6 健康监测对所有拥有感染风险的人员按照DB11/T456-2007中6的规定进行健康监测，防止疫病传播。6.7 样本标记记录注意事项（1）采集的遗传资源样本应做好报备，应符合HJ628-2011中15.1的规定。（2）样本采集记录的事项应该包括且不限于：采集人的基本信息（姓名、身份证号、所属机构、地址、）、审批部门和审批文号、采集目的、采集时间、采集地点信息（地理位置、植被类型、栖息地情况、经纬度坐标、海拔高度、温度、湿度、照片等）、样本编号、采集样本的基本信息（中文名、学名、样本种类、采集数量等）。7存贮和运输注意事项（1）应以最快最直接的途径将所采集的样木送往实验室。（2）对于可在采集后24小时内送达实验室的样本可以在4左右的容器中冷藏运输（可使用冰盒、冰袋等辅助控制温度），对于不能在24小时内送达实验室但不影响实验结果的样本，应以冷冻状态运输。（3）在运输过程中应避免样本泄露及被污染。（4）所有运输包装均应贴上详细标签，并做好记录。（5）制成的涂片、触片、玻片应按照NY/T541-2016中9.4的规定进行执行。