菜豆荚斑驳病毒RT-PCR试剂盒说明书.docx

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1、菜豆英斑驳病毒RTPCR试剂盒说明书1、试剂盒简介货为了适应瓜类菜豆荚斑驳病毒RT-PCR试剂盒快速检测和疫病研究的需要，本公司参照OIE国际标准中规定的引物序列，经多次实验及系统优化，开发生产了本试剂盒。应用本试剂盒进行检测具有快速、灵敏、特异、准确、安全操作简单、应用广泛和高通量检测等特点及优点。2、试剂盒组成：试剂盒组成包括核酸提取试剂和核酸扩增试剂，具体组成参见表1：s表L试剂盒组成（50test/盒）组成成分体积梅DNA提取液15mlXl管样品DNA提取液2500l1管核酸扩增试剂：DEPC水5mlXl管BPPCR反应液750lX1管Taq酶（5Uul）40lX1管阴性对照ImIXI

2、管BP阳性对照ImIXl管操作流程：1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4C。2 .设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50uL；3 .样本孔中加入待测样本50uL：空白孔不加。4 .除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100uL,用封板膜封住反应孔，37C水浴锅或恒温箱温育60min.5 .弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350UD,静置Imin,甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）.6 .每孔加入底物A、B各50nL,37C避光孵育15min,7 .每孔加入终止液5

3、0uL,15min内，在45Onnl波长处测定各孔的OD值。样本：血清血浆组织匀浆等液体样本标记物，血清血浆组织匀浆等应用，仅用科研实验检测定量，定性检检测方法：夹心法技术要求I全程按说明书步骤检测，操作规范，专业，仪器设备齐全。规格：48t96t性状：液体运输方式：快递发货有效期：6个月品特点：灵敏性高，-一性，吸附均匀，吸附性好，回收利用率高，是一款可以让您放心选购的产品。使用范围：此产品供科研实验使用，不得用于-一0用途：用于测定人血清、血浆、组织及相关液体样本中的含量或活性。注意事项：1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，醉标包被板开封后如未用完，板条应装入

4、密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。2 .各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。3 .请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔di一孔的OD值）,请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）.4 .封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5 .底物请避光保存。6 .严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.7 .所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。8

5、 .本试剂不同批号组分不得混用。9 .不能使用过期产品。10 .如与英文说明书有异，以英文说明书为准。每个样品测试反应体系配制见卜.表2.：表2每个样品测试反应体系配制表试齐1PCR反应液Ta酶合计用量14.5L0.5UL15UL样本处理及要求：1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4C过夜后于100Og离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20C或-80C保存，但应避免反复冻融。2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8CIOoOg离心20分钟，或将标本放于-20C或-8(C保存，但应避免反复冻融。3. 组织匀浆：用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲

6、洗组织，去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果)，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如Ig的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。将匀浆液于500OXg离心5、10分钟，取上清检测。4. 细胞培养物上清或其它生物标本：10OOg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20或-80C保存，但应避免反复冻融C注：本公司提供试剂盒免费代测服务。需要其他检测试剂盒请咨询销售人员。试剂盒组

7、成及试剂配制：1 .酶联板(Assayplate)：一块(96孔)。2 .标准品(Standard)：2瓶(冻干品)。3 .样品稀释液(SampleDiluent)：l20ml三4 .生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibodyDiluent)：IXlOml/瓶。5 .辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidinDiluent)：IXlOmI/瓶。6 .生物素标记抗体(Biotirantibody)：1X120U1/瓶(1：100)7 .辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin)：1X120U1/瓶(1：100)8 .底物溶液(TMBSubstrate)：IXIOInl/瓶。9 .浓洗涤液(WashBuffer)：lX20ml瓶，使用时每瓶用蒸镯水稀释25倍。10 .终止液(StopSolution)：1。IOnd/瓶(2NH2S04)。