实验室基本技能培训.ppt

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1、实验基础知识实验基础知识/基本技能培训基本技能培训实验目的实验目的 谨记实验室规程谨记实验室规程 认识分子生物学实验的主要仪器设备认识分子生物学实验的主要仪器设备 掌握分子生物学实验仪器设备基本技能掌握分子生物学实验仪器设备基本技能目目 录录前言：分子生物学实验规程前言：分子生物学实验规程第一节：分子生物学实验设备第一节：分子生物学实验设备第二节：分子生物学基本技术第二节：分子生物学基本技术第三节：实验安排第三节：实验安排实验规程实验规程 严格遵守生命科学中心制定的安全规则。严格遵守生命科学中心制定的安全规则。 发现实验室发现实验室/楼内任何地方有危害安全之人、事、楼内任何地方有危害安全之人、

2、事、物等，必须立即向有关人员反映并作紧急处理。物等，必须立即向有关人员反映并作紧急处理。 1) 穿着规定穿着规定 必须按规定穿戴必须按规定穿戴工作服工作服。 进行危害物质、挥发性有机溶机、特定化学物质进行危害物质、挥发性有机溶机、特定化学物质等化学药品操作实验，必须要穿戴防护具（防护等化学药品操作实验，必须要穿戴防护具（防护口罩口罩、防护、防护手套手套、防护、防护眼镜眼镜）。）。 长发及松散衣服妥善长发及松散衣服妥善固定固定。实验规程实验规程2) 饮食规定饮食规定 禁止在实验室禁止在实验室吃喝吃喝食物且使用化学药品后食物且使用化学药品后需先洗净双手方能进食。需先洗净双手方能进食。 严禁在实验室

3、内吃严禁在实验室内吃口香糖口香糖。 禁止使用实验室仪器冷藏禁止使用实验室仪器冷藏/加热食物。加热食物。 实验规程实验规程3) 药品操作相关规定：药品操作相关规定： 操作危险性药品请操作危险性药品请务必遵守务必遵守操作守则或遵操作守则或遵照老师操作流程进行实验，勿自行更换实照老师操作流程进行实验，勿自行更换实验流程。验流程。 识记清楚药品危害性，避免危害发生。识记清楚药品危害性，避免危害发生。实验规程实验规程4) 用电安全相关规定：用电安全相关规定： 按照规定（电压、功率）合理用电。按照规定（电压、功率）合理用电。 手上有水或潮湿请勿接触电器用品或电器设备。手上有水或潮湿请勿接触电器用品或电器设

4、备。 掌握主要仪器、设备的性能和操作方法，严格按掌握主要仪器、设备的性能和操作方法，严格按操作操作规程规程操作。操作。 最后离开实验室务必随手将不用的水、电等开关最后离开实验室务必随手将不用的水、电等开关关闭。关闭。如：擦拭、维修过程中要关闭电源如：擦拭、维修过程中要关闭电源实验规程实验规程5) 环境卫生相关规定：环境卫生相关规定： 注重环境卫生，并须保持整洁。注重环境卫生，并须保持整洁。 化学物溢满地面或工作台时应立即选用合适的方化学物溢满地面或工作台时应立即选用合适的方法擦拭冲洗干净。法擦拭冲洗干净。 严格区分严格区分开污染区和洁净区开污染区和洁净区。 污染区：戴手套操作。污染区：戴手套操

5、作。洁净区：徒手操作。洁净区：徒手操作。实验要求实验要求 1) 详细详细记录记录和和分析分析实验结果，并按时提交实验结果，并按时提交实验报告实验报告； 2) 实验中一定要处处用实验中一定要处处用心心、勤动、勤动手手，多，多问问为什么；为什么； 3) 仔细仔细操作操作和和观察；观察； 4) 保留好每一步的保留好每一步的实验样品实验样品，在确准的情，在确准的情况下才能当废液扔掉。况下才能当废液扔掉。分子生物学实验设备分子生物学实验设备 1) 温度控制系统温度控制系统 2) 实验用水处理系统实验用水处理系统 3) 消毒系统消毒系统 4) 计量系统计量系统 5) 离心设备离心设备 6) 电泳装置电泳装

6、置 7) 凝胶成像系统凝胶成像系统 8) PCR仪仪 9) 生物培养设施生物培养设施 10) 蛋白质检测设备蛋白质检测设备 11) 其他设备其他设备温度控制系统温度控制系统 环境温控：大部分的分子生物学实验都要求在环境温控：大部分的分子生物学实验都要求在一定的温度下进行操作，为了保持这些条件，实验一定的温度下进行操作，为了保持这些条件，实验室应装备室应装备空调空调等。等。 药品、试剂、样品等的保存：不同药品、试剂、药品、试剂、样品等的保存：不同药品、试剂、样品要求在不同的温度下保存，实验室必须备有样品要求在不同的温度下保存，实验室必须备有44、2020、8080的的冰柜冰柜/ /箱箱，需要在更

7、低温度下保存，需要在更低温度下保存的样品，则须使用的样品，则须使用液氮罐液氮罐。 药品、试剂、药品、试剂、样品等的样品等的取放取放温度控制系统温度控制系统 低温操作可以用低温操作可以用制冰机制冰机制冰块降温；制冰块降温； 对于需在较高温度下进行的操作，则可对于需在较高温度下进行的操作，则可使用使用烘箱烘箱、微波炉、恒温水浴锅、恒温微波炉、恒温水浴锅、恒温空气摇床空气摇床等。等。实验用水实验用水 一次蒸馏水：水经过一次蒸馏，一次蒸馏水：水经过一次蒸馏，不挥发的组分不挥发的组分残残留在容器中被除去，留在容器中被除去，挥发的组分挥发的组分（氨、二氧化碳、有（氨、二氧化碳、有机物）进入蒸馏水的初始馏分

8、中，通常只收集馏分的机物）进入蒸馏水的初始馏分中，通常只收集馏分的中间部分，约占中间部分，约占6060。 多次蒸馏水：在一次蒸馏水中加入碱性高锰酸钾多次蒸馏水：在一次蒸馏水中加入碱性高锰酸钾溶液，除去溶液，除去有机物和二氧化碳有机物和二氧化碳；加入非挥发性的酸；加入非挥发性的酸（硫酸或磷酸），使（硫酸或磷酸），使氨氨成为不挥发的铵盐。成为不挥发的铵盐。 无（去）离子水：指除去了呈离子形式杂质后的无（去）离子水：指除去了呈离子形式杂质后的纯水。主要指采用离子交换树脂处理方法，应用离子纯水。主要指采用离子交换树脂处理方法，应用离子交换树脂去除水中的阴离子和阳离子，但水中仍然存交换树脂去除水中的阴离

9、子和阳离子，但水中仍然存在可溶性的有机物。在可溶性的有机物。实验用水处理系统实验用水处理系统实验用水实验用水 超纯水：既将水中的超纯水：既将水中的导电介质导电介质几乎完全去除，又将几乎完全去除，又将水中不离解的水中不离解的胶体物质胶体物质、气体气体及及有机物有机物均去除均去除至很低程至很低程度度的水。的水。 超纯水中除了水分子超纯水中除了水分子(H(H2 20)0)外，几乎没有什么杂质。外，几乎没有什么杂质。 各种用水，在贮存中都会被污染：各种用水，在贮存中都会被污染： 塑料容器塑料容器会产生有紫外吸收的有机物；会产生有紫外吸收的有机物； 玻璃和金属容器玻璃和金属容器会产生金属离子的污染；会产

10、生金属离子的污染； 长时间放置长时间放置更会使水长菌，空气中更会使水长菌，空气中COCO2 2会溶入水中。会溶入水中。 所以贮存一定要隔绝空气，密封盖严，必要时贮存所以贮存一定要隔绝空气，密封盖严，必要时贮存在冰箱的冷藏室中；最好使用在冰箱的冷藏室中；最好使用“新鲜的水新鲜的水”。实验用水处理系统实验用水处理系统分子生物学实验用水分子生物学实验用水 普通蒸馏水、二次蒸馏水、无普通蒸馏水、二次蒸馏水、无/ /去离子水、超纯水。去离子水、超纯水。实验用水处理系统实验用水处理系统 常用的灭菌方法：高温、高压灭菌、紫外线常用的灭菌方法：高温、高压灭菌、紫外线照射、火焰焚烧、过滤除菌、酒精等试剂浸泡消照

11、射、火焰焚烧、过滤除菌、酒精等试剂浸泡消毒等，因此实验室必须配备各种无菌处理设备。毒等，因此实验室必须配备各种无菌处理设备。 常用的灭菌仪器设备：常用的灭菌仪器设备：高压灭菌锅高压灭菌锅、紫外灯紫外灯、酒精灯酒精灯、滤膜滤膜等。等。消毒系统消毒系统 常用的定量系统有：称量系统、液体体积度常用的定量系统有：称量系统、液体体积度量系统、量系统、pHpH测定系统、液体溶质定量系统等。测定系统、液体溶质定量系统等。 称量仪器：最常用的是称量仪器：最常用的是电子天平电子天平。 酸碱度酸碱度pHpH测量仪器：最常用的是测量仪器：最常用的是pHpH试纸试纸和和pHpH计计。计量系统计量系统液体体积度量仪器：

12、常用的有各种液体体积度量仪器：常用的有各种量筒量筒、移液移液管管、容量瓶容量瓶、移液器移液器。计量系统计量系统 液体溶质定量仪器：主要有液体溶质定量仪器：主要有紫外紫外分光光度分光光度计和计和可见可见分光光度计等。分光光度计等。 计量系统计量系统实验用离心机分为实验用离心机分为制备性制备性离心机和离心机和分析性分析性离心机。离心机。制备性离心机主要用于制备性离心机主要用于分离分离各种生物材料。各种生物材料。离心方法是分离和制备生物大分子最常用的手段。离心方法是分离和制备生物大分子最常用的手段。制备性离心机可分为三类制备性离心机可分为三类: :低速低速、高速（冷冻）高速（冷冻）、超速超速离心机。

13、离心机。离心设备离心设备 电泳是生化实验中最常用最重要的实验技术电泳是生化实验中最常用最重要的实验技术之一，主要用于分析、鉴定，也可用于制备。之一，主要用于分析、鉴定，也可用于制备。 电泳装置由电泳装置由电泳仪电泳仪和和电泳槽电泳槽两部分组成。两部分组成。 电泳仪：电泳时提供一定的电压和电流电泳仪：电泳时提供一定的电压和电流 电泳槽：电泳槽：凝胶电泳系统的核心部分，根据电凝胶电泳系统的核心部分，根据电泳的原理，凝胶都是放在两个缓冲腔之间，电场泳的原理，凝胶都是放在两个缓冲腔之间，电场通过凝胶连接两个缓冲腔。通过凝胶连接两个缓冲腔。电泳装置电泳装置 电泳槽：核酸或蛋白质的电泳定性电泳槽：核酸或蛋

14、白质的电泳定性/ /定量分析定量分析时的凝胶支架。时的凝胶支架。 电泳槽又分为电泳槽又分为水平水平电泳槽和电泳槽和垂直垂直电泳槽。电泳槽。电泳装置电泳装置 是分子生物学实验中的重要是分子生物学实验中的重要观测仪器观测仪器，几乎全几乎全部的实验结果部的实验结果都需要经由凝胶成像系统来观察。都需要经由凝胶成像系统来观察。 可用于观察分析各种透明或不透明的电泳图像，可用于观察分析各种透明或不透明的电泳图像，包括包括琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳检测检测DNADNA结果的观察、结果的观察、PCRPCR产物产物的检测观察，的检测观察，垂直板凝胶电泳垂直板凝胶电泳检测基因多态性的银检测基因多态性的银染胶、染

15、胶、蛋白胶蛋白胶、斑点印迹斑点印迹（RNA/RNA/蛋白质检测）结果蛋白质检测）结果的观察等。的观察等。凝胶成像系统凝胶成像系统紫外分析仪紫外分析仪 用于检测许多主要生物大分子物质如蛋用于检测许多主要生物大分子物质如蛋白质、核苷酸等。白质、核苷酸等。 PCR(Polymerase Chain Reaction) PCR(Polymerase Chain Reaction)是指聚合是指聚合酶链式反应。其反应是用酶链式反应。其反应是用DNADNA聚合酶在聚合酶在体外大量扩体外大量扩增增DNADNA片段的一种方法。片段的一种方法。 PCRPCR仪就是将此方法实现了仪就是将此方法实现了自动化操作自动化

16、操作的一的一种仪器，是分子生物学实验种仪器，是分子生物学实验常用和必备常用和必备的设备。的设备。 PCRPCR仪包括普通仪包括普通PCRPCR仪、仪、梯度梯度PCRPCR仪仪、荧光定、荧光定量量PCRPCR仪。仪。PCR仪仪 超净工作台超净工作台 恒温培养箱恒温培养箱生物培养设施生物培养设施 蛋白电泳槽和转印槽蛋白电泳槽和转印槽- -用于用于western-blottingwestern-blotting实验实验蛋白质检测设备蛋白质检测设备 酶标仪酶标仪- -用于用于ELISA ELISA （酶联免疫吸附实验）实验。（酶联免疫吸附实验）实验。蛋白质检测设备蛋白质检测设备 实验室除以上常规设备和设施外，还必须装实验室除以上常规设备和设施外，还必须装备下列一些常用设备：备下列一些常用设备：A.A.通风柜通风柜：用于有害和有毒气体的操作。：用于有害和有毒气体的操作。 B.B.组织打碎机和匀浆器：用于各种生物材料、动组织打碎机和匀浆器：用于各种生物材料、动植物组织和细胞的破碎。（植物组织和细胞的破碎。（研钵研钵）C. C. 超声清洗机超声清洗机：用于各种器皿、移液管和自动取：用于各种器皿、移液