课题申请书-淫羊藿的炮制机理.docx

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1、要，研究假说：中药经炮制后可提高活性成分的吸收,从而达到增加药效的目的.本研究选择滓羊指（EPiInCdiiJmkreunumNukai.利用AEME/ToX平台研究单体活性成分EpimedinA、EpiaedinB.EpimedinC.Icariin、BaohusideI的吸收、代谢机理与动力学及淫羊紫炮制品的标准提取物中这5个主要活性成分的吸收与代谢及其相互作用，从中药活性成分吸收与代谢的珀度闺明淫羊指的炮制机I也中药烟洌的科学研究起步较晚，时减毒或地效的物质基础及炮制机理研究较少.目的对中药炮捌机理的喇述只是停用在该过程的两跳即化学成分的变化和约理的效层面，而对用明炮制机理的重要环节炮制

2、前后有效成分的吸收、代谢研究不好深入,本课时拟从更深层次上阐明中药炮制机理，同时为制定合理的炮制工艺和质量标准提高科学依据，为中药现代化、国际化做出更大贡献，（一）立项依据与研究内容（4000-8000字）1 .项目的立项依据*中药炮制是我国人民在数千年的医疗实践中不断总结、改进、发展形成的一套传统制药技术.和中药史方一起构成j祖国医药学的两大鲜明特色.目前对中药炮制机理研窕所采用的方法有r应用化学方法进行研究：中药的疗效，是由于共所含的化学成分决定的.中药经过炮制后,所含的化学成分的性防和含出会产生不同程度的改变，因而药理作用、临床疗效也会发生相应变化.可见，研究中药炮制前后化学成分性侦和含

3、疑的变化是中药炮制机理研究的至要内容，该方法在,定程度上能用明炮窈原理，而且能指护炮制工艺的设计和改进，也是制订质状标准的重要依据。蔡宝吕等测定了马钱子不同炮制品中生物轼和日被f许的含址,表明炮制后生物碱和4钱子背的含盘均降低：蔡宝昌等从炮制前后的乌钱子中提取鉴定了16个生物碱,其中异马我广域等为新生物班：应用实蕤药理学方法迸行研究：中药的临床研究由于受到北方用药和患者时象的制约，-殷不易进行，加上很多中药化学成分研究还缺乏与药效的紧密联系，或者尚属空白，因此实验药理学的研究也是揭示中药炮制机理的方法之】应用实验药理学的方法研究中药炮制,主要选用适合中医病理模型的方法和指标来进行,或选用已有的

4、药埋方法和指标来进行.在化学成分不清的情况下，通过实验药理学的方法来研究炮制前后的生物活性变化，也可达到控制炮制质量和拈停1；改革的目的。如：蔡宝昌等力的研究表明马钱子不同胞制品的急性毒性较生品均行所降低：斗聃等,的研究表明草鸟用新方法炮制后具fj对心律影响小、毒性低等优点.总之，目前中药炮制机理研究主要通过炮制前后药物有效成分含软或溶出量增加、与治疗无关的成分的减少和西材中所含院的活力的破坏以保留有效成分等化学成分变化的用度和炮制前后药理毒理的对比等角度来用述.*从目前对中药炮制机理的研究现状可看出；对炮制机理阐述的过程中缺少架沟通中药炮制前后化学成分变化与药理药效变化之间关系的桥梁一一中药

5、活性成分AI)ME/Tok系统的研究：中药活性成分吸收与代谢是中药产生生物效应的重要环节,更必彻底阐述中药炮制机理的瓜佳切入点.本研究拟利用中药活性成分细胞层次的ADME/Tox系统研究中药淫羊检的入药品种之一淫羊前(EpimediumkoreanumNakai.的炮制机理。1.3为了充分发挥药物的疗效,必须增加布效成分在体内的溶出度、择放度和吸收率，以提离生物利用度，然而药物在体内的效的发挥很大程收上取决F血药浓度的高低，而药物在生物体内的吸收、代谢与血药浓度的高低有密切关系。目前，口服给药在各种给药途径中占有主导地位,因此.筠物的ADME11ox系统研究是生物药剂学研究的重点之一ADMEo

6、x系统区别于以前的吸收、分布、代谢、排泄的小级研究不同在于：提取与筛选同时进行.可以全面检测和预见药物提取过程中成分及在体内吸收、分布、代谢、抒泄和毒性各方面的问题；用细胞特别是人源细恂进行，来用高通玳技术时国外对药物ADMEToX系统(吸收、分布、代谢、排泄、毒理、药物一药物之间相互作用)方面的研分布常代视,从而多种研究药物肠道吸收的生物学方法直运而生.ADMEToX系统研究中最著幺的吸收模型一-Caco2模型被美国FDA认为是预测人体药物吸收的行之有效的方法，Caco-2模型辅以大鼠在体肠灌流模型可以从在体和细胞两方面全面阐述药物的ADME过程及其变化。(I)Caco2细胞模型Caco-2

7、细胞来源于人体结肠腺痛细胞，由于Caco-2细胞在培养条件下可自发进行上皮样分化并可形成紧密联结,其形杳学、标志碑的功能表达及渗透特征与小肠类似，CaCo-2细胞模组可作为研究小肠衣皮细胞药物转运和代谢的体外模型.其优点为:省时、可测定药物的细胞摄取及跨膜转运、Caco-2细胞内有药物代谢酸，可在代谢状况下冽定药物的跨眼转运、CaCo-2细胞与小肠上皮细胞近似CaCo-2细胞易干培养且生命力强、GICO2细胞来源是人结肠点细胞,同源性好，可用于区分肠腔内不同吸收途径的差别.CaCU-2细胞模型的域本特点Caco-2细胞系结构和生化作用类似于人小肠卜皮细胞.含有与小肠刷状缘上皮相关的酪系，与正常

8、的成熟小肠上皮细胞.在体外培育过程中出现逆向分化(反分化)不同，Caco-2细恂在传统的细胞培养条件卜,生长在多孔的可渗透的景隙(Po1.ycarbonate)原上可达到融合并自发分化为肠上皮细胞,形成连续的项层(mono1.ayer)培育约IOd后，单层的跨度电阻约为2600。c细胞密度约为0.9X10”细胞.cm,此时CaCO-2细胞单层时漏出标志物如聚乙二醉(Mr100O)或I1.渊醉是不海透的,这种性筋可以维持恒定约20d,由于CaCo-2细胞性质类似小肠上皮细胞,因此可以在这段时间进行药物的跄膜转运实验Q1.Co-2细胞模型的药物转运机理在Caco-2细施模型中,药物的转运过程为:药

9、物分子从Caco-2单细施层的段例肠腔(W(AP侧)胯过Caco-2单细脆层或经由细胞间隙到达基底侧(B1.恻)药物跨过肠上皮有4条途径:被动转运；胞旁戮运;栽体介导转运;胞饮。(2)在体隔灌流模型特点：保证了肠道神经以及内分泌输入的完好无损，同时也保证了血液及淋巴液的供应，提高了生物活性.在该模型中还可测定肠道代谢物.该法既可从肠腔取样，又可从血液中取样.虽然这些研究常在麻肝的小动物上进行,但借助肠插管,非麻醉的实验动物及人体的淞流研究亦可进行“。在体顺道灌流不仅提供了较高的俎织活性，而I1.提供了额外的取样部位。已经建立了融肠原位灌流实腌取得的药物肠道滋透率同人体研究中口服给予药物溶液后吸

10、收的药物量之间的关系。I1.uM.等学者采用Coca-2和肠滞流模里等方法时黄雨和类黄阴成分的吸收与代谢进行了研究E“：研究结果表明.一：黄胡甘类化合物在肠道中降解成伊元再吸收，而淫羊尔计主要是以它的次级以李触H=形式吸收。类黄丽的吸收与代谢途径可归纳为FigI*淫羊祗为传统补肾中药,在民间沿用已有千年历史具补肾阳强筋骨.祛风湿功效.临床常用于阳疹遗精,筋骨疲软，风湿榭懒等证,淫羊保中含多种黄胡类成分，目前研究证明24：滓羊靠总黄酮为淫羊精主要活性成分。淫羊於总黄雨在心血管系统、中枢神经系统、由液系统、免疫系统、抗炎、抗骨质硫松、抗衰老、抗肿病等25方面取得较大的进展.临床常见的涅羊希炮制品彳

11、i淫羊蕾、羊脂炙涅羊希、盐涅羊素和酒涅羊茄等。目前对淫羊指的炮制研究主要有以下两个方面：(D炮制前后黄酮类等化学成分的变化陈惠玲等?采用紫外分光光度法测定粗毛涅羊素生品及4种不同炮制品中总黄丽的含求，总黄阴含量由高到低IBi序为：生品清炒品酒炙品盐炙品羊脂炙品.(2)炮制前后药埋、药效的变化淫羊希炮制忘时心血笆、中枢神经系统等方面筠理、药效较生品行显提裔，故历代临床用茹均以炮制品为主.淫羊转炮制处中总黄胡含址低于生丛,而临床用药历代均以炮制品为主，且认为淫羊紫炮制后药效较生品有显箝提高。因此从涅羊炮制Ir后化学成分变化的角度并不IMMI其炮制机理：对知后其药效的，强也缺乏令人倡服的储述，即只知

12、其然而不知其所以然淫羊花炮制品中总黄眼含此低于生品,而Ifi床用约历代均以炮制品为主，即其炮制品药效发生品有髭暑提高，因此我们的假说为；淫羊的炮制机理是，淫羊炮修后能被机体Ift收的黄含量相对增加I中药经过他制，可提济活性成分的吸收，从而达到增强其药效之目的即该研究试图从活性成分ADME,Tox层次阐明淫羊W的炮制机理,以期填补国内目阐中药炮制机理研究领域的一个空白.中药炮制的科学研究起步较晚.许多炮制经验.只知道炮制后可以降低毒性、可以增强疗效，但对戒毒或增效的物质延础及炮制机理却长期处于无知状态，即只知其然而不知其所以然.目前对中药炮制机理的阐述只是停留在该过程的两端即化学成分的变化和筠理

13、药效的变化,而对阐明炮制机理的关煜环节炮制前后中药活性成分的吸收等研究不够深入,本课题拟从更深层次上阐明中药炮制机理，同时为制定合理的炮制工艺和筋地标准提供科学依据.为中药现代化、国际化做出更大贡献.考文献1 .叶定江主编.中药炮制学国.上海:上海科学技术出版社,1996:82 .蔡宝昌等.马钱尸不同炮制品中总生物碱的测定及急性毒性试验的比较.中国中药杂志，1994,19(10):5983 .蔡定吕等.炮制对马钱子中马钱干忒的影响.中国中药杂志，1991,19(6):3464 .蔡宝昌等.凸钱子中16个生物碱类化合物CWR谱的数据分析.西学学报.199%29(1):445 .马聘,蔡宝昌,陈龙

14、.草乌几种炮制品的雄性实验比较.中国中药杂志，1994,19(4):2166 .王舞主编.中药研究现代方法学.北京:化学工业出版社,2001：67,杨海涛，王广基，Caco-2单层细胞模型域其在药学中的应用，药学学报，2000,35(10),797800. ,robeitAC,Phi1ipSB.Caco-2ce1.1.mono1.ayersasmode1.ordrugtransportacrosstheintertina1.mucosaJ.PharmRes,1990,7(9):902. HIjRaubTj.BonchardtRT-Charac1.erizationofthehumanco1.o

15、ncarcinomace1.1.1.i11eCac-2)asamode1.systemforintestina1.epithe1.ia1.pcrmcabi1.ityJ.Gast .DhircnRT.App1.icationsoftheCaco-2mode1.inthedesignanddeve1.opmentofora1.1.yac(ivcddrug$;e1.ucida(ionofbiocbenica1.andphysica1.barriersposedbyt1.)eintestina1.eithe1.ium(J.dvDrugDe1.ivRev.1997.23(1):77. aHAhrcnst

16、cdtO-Ha1.1.grcnR.cta1.Regina1.jejuna1.pcrfusion,anewinvivoapproachtostudyora1.drugabsorpioninmanJ.Pharmres.1992.9:1234. eM1ChenJ.1.inH.DisposidonofF1.avonoidsviaReeyding:Meehani$(icStudiesofDispositionofApigeninintheCaco-2Ce1.1.Cu1.tureMix1.e1.J.Phannaco1.Exp.Therap,307(I)314-21.2OO3bM.Sinko.PJ.DcMecre.A1.JJohnson1DAand