云南省4种伊蚊的乙型脑炎病毒分离物的研究.docx

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1、云南省4种伊蚊的乙型脑炎病毒分别物的探讨云南省4种伊蚊的乙型脑炎病毒分别物的探讨张海林施华芳米竹青自登云龚正达侯宗柳李兆祥张云智张嘉玉杨兰萍摘要在云南省西南边疆9县市捕获伊蚊属雌性成蚊16种19367只，用细胞法和乳鼠法分别病毒。从185批6491只白纹伊蚊中分别到病毒2株，从50批1605只剌扰伊蚊中分别到病毒2株，从23批772只窄翅伊蚊中分别到病毒2株，从4批103只阿萨姆伊蚊中分别到病毒1株。其它12种共10396只伊蚊的病毒分别物为阴性。分别到的7株病毒经免疫荧光、酶免疫、血凝抑制和中和试验鉴定，均为乙型脑炎病毒(JEvirus)0白纹伊蚊是野外竹林的优势蚊种。分析认为白纹伊蚊在当地

2、乙型脑炎病毒保存和传播中起重要作用，刺扰伊蚊、窄翅伊蚊和阿萨姆伊蚊亦可参与该病毒的传播。Iso1.ationOfJapaneseEncepha1.itisVirusfromFourSpeciesofAedesMosquitoinYunnanProvinceZhangHai1.inShiHuafangMiZhuqingZiDengyunGongZhengda(YunnanProvincia1.InstituteofEpidemicDiseasesContro1.andResearch,Da1.i,Yunnan671000)AbstractAtota1.of19367adu1.tfema1.emo

3、squitoesbe1.ongingto16speciesofAedesgenuswerecapturedfromninecountries,south-westernpartOfYunnanProvince,China,andwereexaminedbyC636ce1.1.methodandsuck1.ingmousemethod.TwostrainsOfJapaneseencepha1.itis(JE)viruswereiso1.atedfrom6491(185poo1.s)Aedesa1.bopictusytwostrainsofJEviruswereiso1.atedfrom1605(

4、50poo1.s)Ae.veansztwostrainsofJEviruswereiso1.atedfrom772(23poo1.s)Ae.Iineatopennis,andastrainofJEviruswasiso1.atedfrom103(4poo1.s)Ae.assamensis.Iso1.ationofJEviruswasnegativetoother12speciesofAedesmosquitoes.Ae.a1.bopictuswasthesuperiorspeciesofmosquitoesinbambooforest.Theseresu1.tsindicatedthatAe.

5、a1.bopictusfromYunnanhasapotentia1.ro1.einthemaintenanceandtransmissionofJEvirusinnature.Ae.veans,Ae.IineatopennisandAe.assamensisarea1.soconsideredtobetransmittingvectorofJEvirusinYunnan.KeywordsMosquito,AedeszJapaneseencepha1.itisvirus.Vector,Yunnanprovince国内外在流行性乙型脑炎(简称乙脑)媒介探讨中做了大量工作，明确了三带喙库蚊(CU1

6、.eXEtaeniorhynchus)是本病主要传播媒介，一些库蚊属蚊虫在乙脑病毒传播中亦起重要作用。然而，伊蚊在本病传播中的作用探讨较少。为了解伊蚊属蚊虫自然感染乙脑病毒状况及媒介意义，我们在云南省西南部热带地区采集蚊虫进行病毒分别，现将结果报告如下。1材料与方法1.1蚊虫采集在云南省景洪、动腊、劫海、河口、孟连、耿马、盈江、潞西和瑞丽9县市的野外竹林和畜圈捕蚊，将蚊虫置低温冻死后分类编号，2050只一批，放入小瓶内，液氮冻存待检。1.2病毒分别蚊虫经常规处理后，制成接种液，接种于C6/36细胞和乳鼠分别病毒。细胞出现规律病变或乳鼠发病即行鉴定。1.3.1 抗体乙脑病毒家兔免疫血清为本室自制

7、；乙脑病毒单克隆抗体是中国预防医学科学院病毒学探讨所和中国药品生物制品检定所的制品；兔抗鼠荧光抗体和羊抗兔荧光抗体是北京生物制品探讨所和兰州生物制品探讨所的制品；酶标SPA是中国预防医学科学院流行病学微生物学探讨所的制品。1.3.2 抗原乙脑病毒抗原为鼠脑蔗糖丙酮法抗原，本室制备。1.3.3 免疫荧光试验(IFAT)接受间接法。感染细胞培育至第5天，将细胞吹下，滴于玻片，常规染色制片，用O1.YMPUS荧光显微镜检查。1.3.4 细胞酶免疫(C-E1.A)试验感染细胞培育于聚苯乙烯塑料板，至第5天，常规固定，加各种结合物及样品，用目测法判定结果。方法详见文献1。1.3.5 血凝(HA)及血凝抑

8、制(H1.)试验接受常规微量法。用0.5%鸽血球测定。血清用白陶土和鸽血球常规处理,抗原为4u0以50%的血球凝集被抑制为终点。1.3.6 和试验接受固定血清稀释病毒法。用34周龄小白鼠测定，视察14d,按Reed-MUenCh法计算中和指数。2结果2.1病毒分别在上述9县市共采获伊蚊属雌性成蚊16种19367只作病毒分别，从白纹伊蚊、剌扰伊蚊、窄翅伊蚊和阿萨姆伊蚊中分别出病毒7株（表1）。所获毒株均能引起乳小白鼠或3周龄小白鼠发病和死亡，亦能导致C6/36细胞出现病变，并具有滤过性。表1从云南省4种伊蚊中分别乙脑病毒Tab1.e1Iso1.ationofJapaneseencepha1.it

9、isvirusfromfourspeciesofAedesmosquitoesco1.1.ectedinYunnanprovince蚊种Speciesofmosq.采集地点Co1.1.ectingsite蚊虫只数No.ofmosq.批数Poo1.sofmosq.阳性批数No.ofpositivepoo1.s病毒号及阳性蚊采集县Viruscodeandco1.1.ectingcountiesofpositivemosq.白纹伊蚊Aedesa1.bopictus竹林Bambooforest64911852B88-81景洪JinghongD266瑞丽Rui1.i剌扰伊蚊Aedesveans竹林Bam

10、booforest畜圈Stab1.e1194411381220B24-5景洪JinghongB86-17景洪Jinghong窄翅伊蚊AedesIineatopennis竹林Bambooforest畜圈StabIe7669632011D107盈江YingjiangB88-17景洪Jinghong阿萨姆伊蚊Aedesassamensis竹林Bambooforest103411.99耿马Gengma其它12种伊蚊（伪白纹伊蚊Ae.pseuda1.bopictus圆斑伊蚊Ae.annanda1.ei台湾伊蚊Ae.formosensis显著伊蚊Ae.prominens、股点伊蚊模拟亚种Ae.gardne

11、riiimitator、白雪伊蚊Ae.niveus白盏伊蚊Ae.a1.boscute1.1.atus环胫伊蚊Ae.desmotes侧白伊蚊Ae.a1.bo1.atera1.is白带伊蚊米基尔亚种Ae.a1.botaeniatusmikiranus爱氏伊蚊Ae.Sdridgei和亚白纹伊蚊Ae.SUba1.bOPiCtUS供10396只蚊虫的病毒分别均为阴性。2.2病毒鉴定2.2.1 免疫荧光试验分别到的7株病毒均与乙脑单克隆抗体或乙脑免疫血清出现特异性荧光反应（表2）o2.2.2 细胞酶免疫试验B88-81B86-17、B88-21和1.99株均与乙脑单克隆抗体或乙脑免疫血清产生特异性酶免疫反

12、应（表2）。2.2.3 血凝特性在pH6.4条件下，7株病毒的鼠脑蔗糖丙酮抗原均能与鸽血球出现凝集，滴度为1：1601：5120之间俵2）。2.2.4 血凝抑制试验全部分别株均能与乙脑病毒产生高滴度的抑制作用，抑制效价高达1：3201：2560（表2）。2.2.5 中和试验B88-81B24-5B86-17B88-21和1.99株对乙脑病毒的中和指数达到123100o（表2）。试验证明，分别到的7株病毒均为乙脑病毒。表2分别自伊蚊的7株乙脑病毒的.鉴定Tab1.e2IdentificationofsevenstrainsofJapaneseencepha1.itisvirusiso1.ated

13、fromAedesmosquitoes毒株VirusstrainsC636细胞法C636ce1.1.method乳鼠法Suckingmousemethod细胞病变CPE免疫荧光JEMcAbIFAT细胞酶免疫JEMcAbC-EIA乳鼠发病死亡I1.1.nessanddeathofmicetested血凝HA乙脑血抑JEHI对乙脑中和指数Neu.indextoJEvirusB88-81?320640794D266?ND+12801280NDB24-5?ND+640320123B86-17?+12806401000B88-21?6403201000D107?ND+160640ND1.99?+5120

14、2560354ND：未做（NOtdone）2.34种伊蚊的分布特点白纹伊蚊在本次调查的9县市均有分布,其活动生态环境主要在居民点旁边竹林和山坡竹林，畜圈和人房内几乎不能捕到该蚊。白纹伊蚊在野外竹林区的构成比为30.46%（7429只/45种24387只），属优势或较优势种。剌扰伊蚊仅在景洪、动腊、耿马和河口捕获，主要分布于野外竹林，在该生境的构成比为12.71%（1194只/17种9394只）;在畜圈也有分布,构成比为1.26%（428只/20种33929只）。窄翅伊蚊在景洪、耿马、瑞丽和盈江的畜圈和野外竹林均有分布，畜圈的构成比为2.89%（696只/19种24060只）,野外竹林（耿马）的

15、构成比为2.75%（76只/24种2760只），其数量较少。阿萨姆伊蚊仅在耿马和潞西的野外竹林捕到，构成比为2.21%（103只/24种4656只），该蚊分布较为局限,且数量较少。3探讨白纹伊蚊在云南分布广泛，尤其在本省西南部热带和邻近热带的地区，是居民点旁边竹林和山坡竹林区的主要蚊种之一。本次9个县市调查，该蚊为野外竹林区的优势或较优势蚊种。白纹伊蚊分布与人居有肯定关系，凡该蚊多的生境，均为靠近村寨的竹林、树林。该蚊嗜血习性较广，并有多次吸血的特性。国外探讨表明，白纹伊蚊能感染、传播和经卵传递乙脑病毒25。本次从云南自然界白纹伊蚊中分别到乙脑病毒，并证明云南该蚊对乙脑病毒有较高的易感性，还能叮咬传播和经卵传递乙脑病毒6,7。白纹伊蚊在乙脑流行中可与库蚊协同作用，是乙脑病毒重要媒介之一，在自然界乙脑病毒保存和传播中起重要作用。以往未见从剌扰伊蚊、窄翅伊蚊和阿萨姆伊蚊中分别到乙脑病毒的报道。这次从这3种伊蚊中分得乙脑病毒，表明它们可参与乙脑病毒的传播。尤其是剌扰伊蚊和窄翅伊蚊，不仅分布于农村畜圈，在野外竹林也有分布，与人畜关系较为亲密，具有重要的流行病学意义。鉴于云南乙脑疫区分布较广，加之自然地理条件较特别，蚊虫种类多，我们认为乙脑媒介亦较为困难，有必要进行深化的探讨。*云南省卫生厅科研基金资助课题