成人呼吸系统感染性疾病病原学诊断专家意见.docx

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1、近H.中华结核和呼吸杂志发布成人呼吸系统感染性疾病病原学诊断专家意见3旨在规范标本的采集、储存、运输、检测过程，提高对感染性呼吸道标本检测效率和准确率.同时对各种检验方法的结果判读进行归纳总结，为临床治疗方案的选择提供用助。呼吸系统感染性疾病是由细曲、病毒、支原体、真菌和寄生虫等多种微生物引起的雪染性疾病.是临床常见病和多发病,病情严重程度因致病原、礴染部位、被感染人群以及合并基础疾病的情况不PJ而上现各异.呼吸道病原学检测标本的采集方法呼吸道精原学标本的聚集方法见表k表I呼吸道病原学标本类型及采集方法标本类型采集方法痰液自主咳痰,诱导痰拭子口咽汉子，鼻咽成子保护住毛刷经支气管镜引导下采集经人

2、工之道内吸引收集分澄物经人工气道,在负压吸引装置前连接无曲蜴器,操作前应明诊皴液聚集部位，必要时给予体位引流或物凰喉，以增加标本的采集量支线管肺泡灌洗液根据病变部位选择翩叶段，使用生理盐水在肺段飒段进行灌注并回收，通过细胞计数进行灌洗夜质量控制，回收率应在3o%0陶腔积液细的培养标本量应21m1.,夷菌培养W10m1.,分枝杆菌培养10m1.如送检结核崂T细胞检测（T-SPoT）还需注意添加肝素抗凝组织活性标本可选择电视辅助胸腔镜手术，气管一支气管内超声引导下肺组织或淋巴结活检，经气管搐肺活检术，CT或B超引导下经皮肺穿剌活检术.标本的运送,储存和预处理1.标本的运送和储存原则首先标签应准确.

3、信息完整，贴在容器上，而不是容器装上.不同病区体检测标本的采集和转运原则见表2.表2不同就原体检测标本的灰条、收集和转运原则不同类型标本采集及、保存和转运时间见表3.枝3不同时间标本的采集信、保存和转运时间标本类型标本采集品收集装置、保存温度和转运时间E清学标IOm血液或5m血清蠹分聘凝采血管密闭容器，室温，2h内含EDTA采血管，室温，2h内抗原或抗血液、脑脊液、尿液等（根体板测据实验室的具体要求）核酸扩增10m1.血液或5m1.血浆2m1.病毒转运培养基密闭容器，室温，2h内2.针对不同病原体的检测方法标木采集后应及时诳行桢依控制，合格的标本应尽可能短期内送检。某些特殊病原体标本的转运、保

4、存和检测方法见表4,笈4特殊病原体标本的转运、保存条件及检测方法特殊病质体标本转运条件和标本保存条件性酒方法细菌无前宫器,室温.2h4X.24h革兰染色,定量培养努卡的革兰染色.弱抗酸傩,培养军团前培养,核酸检测，抗原检测无曲宕器,室温，2h4X2,24h氢石化钾压片或荧光臼染色,真由培养曲建风氧化神压片或荧光臼染色,真菌培养，半乳甘露系胭（GM）辎肺泡子ES六胺很染色,核酸检测,抗原检测Rif三那汁染色,奥的培养,P3球葡英膨缈施抗原分枝杆菌无曲容器，室温，2h4*C,24h涂片抗鳏色,培养，核酸精测病看病房转运培养衽.室温，2h4.5d核酸检测,抗原检测,分圈培养寄生虫尢苗宫那,室温,2h

5、4*C,24h百ism检,核酸检测,抗原检测病原特殊结构.英腺Hix荚麻染色.1.off1.er多色业甲监Sftfe除毛银盐染色去，位红染色i去芽抱孔雀绿染色法，石碳酸蕾红染色i去呼吸道精原体检测方法的优缺点不同检验方法的优缺点见表5.表5病像体不同检测方法的优法点合HfS反应(M1.接PCR,mPCR,RTPCR.qPCR)尚中,快速.便直.可a三候阳在率高.WST制可6失效，用于诊所常见和篁些特殊爬条体（如肺瓶子的、囱）使R科等）等温(tS)增技术(1.AMP.NASBA%RPAASDA)快递,金感，将异BHWS,11Wff1.弓的可吐处,用干诊断常见皿当WMWW芯片技术（多病原等温Jrt

6、imsus芯片技术、POg）快速，皱昌,特异，河心率低大部分椀婀在夕地前迸行悍本和通提取，XMPCRUiff未完全实现样品的处理自动化肥向通用引物3PCR和一代为序（如16$.rs）能向NGSSSBffiNGS血清学试9（如联免及和免18层析等精测）触MnII恰唠原体培H5府可隹失效.诊断案幺定的*体,簸以区分司对面口休博组“X2滔症Ieea牛物和由（BarHB，遇序文程检复汆，M11rt三JWMWO三5K.价格mISa1.网.有S哭,oj11三可雒检iWWSM河象,疑以区分定怡处桃胸原0生物SSwJiftftSsSoae?SJKffS三三ttat,价格用贵目财（2-3黯郡器廉君客质:需媲鬻紫

7、初冲河势盛以国分定毗第5!我病C源体生物陪化生物I1.1.iS恃祀体检蹲在百室早期可怅望K阴性.包活时血清特片性抗体检谶和需要采集软性嘛廨爱卿份血清送行检嬲站快速比较冷JB.价格便宜.可里伊份,像法免佼跳的会巨长蜴阳性,受一百诊断熟性黑条索影胴也可能会出现KR出站里；沆除检1附#!不受机体免疫状况影娟,但准确甯姣低快速（敷分龄至效小时）,可通过计11分析际本中?5龄ta主常露耀翳黑一及格E.wa*三wJ露比礴豚体采取特殊枭色迸示$新蛭济,标本官易收票,并可培电9度及恃异度低，无法制非培养病暇体，合体外勒峨试验结里为治疗IS妙病原培养十分耗时，荣投病（Ret生物培葬用婚供自用的优良或无大进行体外

8、培并芸建助激光1；析电a飞行时间段道技术WWSft.培养后怆组快速需要痫源体培芥焙里和已吟呼置日8检消方法优点缺点注：PCR：聚合梅桂式反应：KV-PCR：实时逆转录PCR：mPCR：多重PCR：qPCR：实时荧光定家KR:1.AMP：环引物介导的等温犷增：NASBA：核酸序列扩增：RPA：更组聚合物扩增；SDA；链置换扩增：POCT:即时检裟或床旁检测：TS；内部转录间隔区；NGS：二代测序技术病原检测结果的判读及其临床价值病原学核查结果的判读应该综合考虑患者的年龄、基础挨病、免疫状态、临床特点、病情严at程度以及先期的抗感染治疗等情况。I.直接抗原快速检测胶体金法病毒抗原快速检测方法简便、

9、快速、成本低.病毒抗原快速检测的特异性收好.但存在般密度低、假阴性率较高的何虺.当临床高度怀疑为病毒感染，但病毒快速检测结果为阴性时，应加做病毒核酸悔测，以排杳假阴性。2.血清特异性抗体检测适合在门诊、急诊或基层医院用于病原体的能连.但由于早期阳性率较低.需要采集急性期及恢夏期双份血清进行检冽和效果评价，但体液免我缺陷的患齐可呈假阴性.3,涂片所获取的各种标本均应行病原学涂片检杳。在结果判读时，需要结合患者的格床疥状和影像学表现,排除操作过程或环境污染的可能.BA1.F肉心沉淀后行六胺银染色、抗酸染色和革兰染色可分别用来检测肺泡子菌、分枝杆菌和部分细菌等.肺穿刺标本和胸腔枳液涂片发现物原体对确

10、诊具干jH1.要意义，4.培养在进行俄培养前必须确定是合格痰标本,并排除操作不当或环境污染的情况.定量培养有助于区分致病窗和定植苗.5,核酸分子扩增检测和底因芯片检测核酸分子扩增及等词扩增域因芯片检涮等方法可实现快速分子诊断，所需时间短，但现行核酸分子扩增技术也存在一定的局限性,尤其是难以快速检测和确定多药耐药病原菌的耐药基因突变部分.呼吸系统感染性疾病是由细储、病毒、支原体、真画和寄生虫等多种微生物引起的心鎏性疾病，是临床常见病和多发病，病情严重程度因致病原、落染部位、被感染人群以及合并基础疾病的情况不同而表现各异.近年来布干耐药菌逐渐增多、人11老龄化及免疫缺陷人和数瓜的增加,使得感染性疾

11、病患者日益增多,因病原学诊断延误或无法确诊，临床有时难以实现精准治疗，影晌患者的疗效和预后，决或导致未知病原在易那人群中的传播扩散。另外.经般性抗感染治疗相对盲目，易发生抗储药物不合理使用或滥用,诱发病原前出现时药、广泛耐药甚至全耐药,给治疗造成更大的困难.近年来，除了常规的涂片、病爆培养及胶体金法以外，诂如核酸分子扩增、生物芯片、维因测序和宏班因组测序等新的筑康学检测技术和方法逐渐应用F临床，大大提高了致病原（细薄、病毒和真曲）的检出率。这些检测方法具有高通盘、高敏感度、高特异度的特点，但同时也存在一定的假阳性率.并受操作技术和临床因素的影响,需要对其结果进行谨慎解读.为此，本专家意见编写组

12、在充分复习文觥和国内外相关研究进展的基础上，结合我国目前的实际情况，制定本专写意见，旨在现莅标本的采集、储存、运输及检测过程，提高对整染性呼吸道标本的检测效率和准确率,提而临床医生判读相关检测结果的能力.一、呼吸道病原学检测标本的采集方法病原学检测标本的采集方法可分为非侵入性和侵入性,前者创伤小，患者易于接受，但容易受到上呼吸道定掖带群的污染：后者为有创性操作，从生理状态下”相对无函”的部位取材，对诊断意义更大，其中组织活检标本是诊断肺部感染性疾病的金标准,应根据患者的临床情况选择最有效的采集方法,首先选择非侵入性方法（无创或微创检查,在非侵入性方法不能确诊时，在高度疑诊的情况下选择仔创检查方

13、法.应对标本采集者进行培训，并对所采集的标本进行质状控制，以提高标本的质依，减少黄阳性和假阴性结果,呼吸道病原学标本的采集方法见表1.表1呼吸道病原学标本类型及采集方法标本类型采集方法痰液自主咳极，诱导痰拭子口咽拭子，外咽拭子保护性毛利经支气管镜引导下采集经人工气道内吸引收集分泌物经人工气道.在负压吸引奘置前连接无菌集痍5JS操作前应听诊痍液枳聚部位，必要时给予体位引流和物理排痍,以增加标本的采集后支气管肺泡液洗液根据病变部位选择灌洗叶段,使用生理盐水在肺段或北段进行灌注并回收,通过细胞计数进行灌洗液质状控制，回收率应在30%以上胸腔积液细菌培养标本量应21m1.,其菌培养N1.Om1.分枝杆

14、菌培养NIOmI.如送检结核感染T细胞检测（T-SPOT）还需注意添加肝素抗凝组织活检标本可选样电视辅助胸腔镜手术,气管一支气管内超声引V下肺祖织或淋巴结活检.经气管镜肺活检术.CT或B超引导下经皮肺穿刺活检二、标本的运送、储存与预处理1.标本运送和储存原则：（1）标本标签掂确且申谢单信息完整，应将标签贴在容器上，而非容器萩上；（2）严格无曲操作；（3）尽快送检标本,应在采样后2h内送达实验室,样本Jft少的标本应于3（）min内送检，避免标本干涸：（4）对一些特定的桥原体，应选择合适的方法对标本进行保存和运送，井及时迸行检测。不同病阻体桧树标本的采集和转运原则见表2,不同类型标本聚集状、保存和转运时间见表3我2不同病原体检测标本的采集、收集和转运原则病原标标本及采集方法收集装置、保存温度和转运保则需铜的培组织、体液及灌洗液等无菌容器.室温.立即送检养拭子标本（次选：推荐使用植绒尼龙拭子（采样成大，易洗脱，检出率裔）拭子转运管.室温.2h内厌氧曲培组织、体液及濯洗液等无曲厌氧瓶，室温，立即送检养拭子标本（次选）：推荐使用植绒尼龙拭子（采样量大,容易洗脱.检出率高）厌氧拭子状运管，室温，2h内真窗培养组织、体液及灌洗液等无菌容器，室温.2h内拭子标本（次选,仅适用于醒母菌和浅衣郃位MTB博柒）拭子转运管.室温.2h内病毒培养组织、体液及灌洗液等病毒转运培养丛，冷藏保