人登革热抗体DFAbELISA试剂盒.docx

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1、本试剂仅供研究使用人登革热抗体(DRAb)EUSA试剂;试骁原理：DF-Ab试剂盒是固相夹心法秘联免疫吸附实脸(EIJSA.己知DF-Ab浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔梅标板内进行检测.先将DF-Ab和生物素标记的抗体同时射育.洗涤后.加入亲和素标记过的HRP.再羟过品育和洗涤,去除未结合的Ife结合物,然后加入底物A、B,和唯结合物同时作用.产生颜色，颜色的深浅和样品中DRAb的活性浓哎呈比例关系,试剂众内容及其配制试剂盒成份(2-8C保存)9648份醐标板1块板塑料脱板盖I块半块96孔配置48孔配徨(96T)即用型华块板配制即用型标准品：4(X)ngm1.1版(0.6m1.)空白对照

2、I版(1.Om1.)I瓶标准品稀择级冲液1程(5m1.1瓶(0.3m1.(0.5m1.Iif(2.5m1.按说明书进行稀稀即用型即用组生物素标记的DF-Ab抗体I瓶(6mDI6(3.0m1.)即用型亲和链梅素-HRPIfift(IOmI)1(5.0m1.即用型洗涤缓冲液I瓶2()m1.)1JSi(IOmI)按说明书进行稀糅底物AIHfe6.0m1.)底物B1Hft6.0m1.)终止液1瓶(6.0m1.)1fit(3.0m1.)即用型1瓶(3.0m1.)即用型1瓶(3.0m1.)即用型人登革热抗体(DRAb)EUSA试剂禽自备材料1 .蒸做水.2 .加样器:5ukIOuk50u1.100uk20

3、0.500u1.100Ou1.3 .振荡器及班力搅拌器等.安全性1 .避免直接接触终止液和底物A、B.一口.接触到这些液体,请尽快用水冲洗.2 .实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆&.3 .不要刖喝吸取试剂盒里的任何成份。人登革热抗体(DF-Ab)E1.1.SA试剂盒操作注意事项1 .试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温.稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存.2 .实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密对保存，以免变质，3 .不用的其它试剂应包装好或前好。不同批号的试剂不要混用。保麻前使用。4 .使用一次性的吸头以免交叉污染.吸取终止液和底物A、B液时.避免使用保金M部分的加样器.5 .使用干净的

4、塑料容器用就洗涤液.使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品.6 .洗涤陶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入湎标反应孔中吸水，?.底物A应挥发，避免长时间打开盖子.底物B对光敬感,避免长时间法麻于光下,避免用手接触.有毒.实验完成后应立即读取OD值.8 .加入试剂的顺序应一致,以保证所布反应板孔温行的时间一样.9 .按照说明书中标明的时间、加液的法及地序进行温的掾作，人登革热抗体(DF-Ab)E1.ISA试剂盒样品收集、处理及保存方法I、血清-操作过程中避免任何细胞刺激使用不含热原和内毒素的试管.收佻血液后，100oXg璃心IO分钟将血消和红细胞迅速小心地分离。2、血浆一一EDTA,柠愫酸盐

5、、肝泰血浆可用于检测，100OXg禹心30分钟去除颗粒。3、细胞1：清液-10Xg黑心10分钟去除颗粒和聚合物.4、保存-如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70匕保存，避免反复冷冻,尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大依颗粒，检测前先面心或过浊，不要在37C或更高的温度加热解冻。应在室海卜解冻并确保样品均匀地充分轿冰.试剂的准备1.标准品：标准品的系列稀样应在实验时准备，不能储存。稀择前将标准品振荡混匀，稀择比例按下表中进行:400ngm1.(6号标准品)200ngm1.(5号标准仙)IOOngZmI4号标准品)SOn步m1.3号标准品)25ngm1.(2号标准品)原倍浓度不用稀科

6、直接加入SoU1.I(X)U1.的原倍标准品加入I(X)U1.的标准品检释液1.u1.的5号标准品加入100uI的标准品稀择液100UI的4号标准品加入100U1.的标准品桶择液100UI的3号标准品加入100uI的标准品稀释液I2.5ngm1.(I号玩准晶)KX)u1.的2号标准品加入100uI的标准IyI稀糅液OngXm1.空白对照原始浓度不用稀和宜接加入501.2.洗涤缓冲液(50)的稚择:懑锻水5()倍稀择.人登革热抗体(DFAb)E1.ISA试剂盒操作步骤I.使用前，将所有试剂充分混匀.不要使液体产牛.大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差2.根据特测样M数证加上标准

7、品的数破决定所衢的板条数.每个标准M和空白孔建议做熨孔.每个样品根据自己的效录来定，能使用笈孔的尽景做发孔。3,加入稀i修好后的标准品SOU1.于反应孔、加入侍测样品SoU1.于反应孔内立即加入50UI的生物素标记的抗体.盖上膜板轻轻振荡混匀,37AW1小时.4 .甩去孔内液体,每孔加满洗涤液.振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸抽干.曳复此悚作3次.如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5 .母孔加入80U1.的亲和链醉素-HRP,轻轻振荡混匀，37C温真30分钟，6 .出去孔内液体,每孔加满洗涤液.振荡3()秒.甩去洗涤液,用吸水纸拍干.重复此操作3次.如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次.7 .

8、姆孔加入底物A、B501.轻轻振荡混匀，37C温Fj1.o分钟,避免光照，8 .取出酹标板，迅速加入50U1.终止液，加入终止液后应立即测定结果,9 .在450nm波长处测定各孔的OD值.性能1 .灵收度：最小的检测浓度小于1号标准品。林锋度的戏性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990.2 .特异性：不与人其它细胞因子反应.3 .正熨性；板内、板间变异系数均小于10%,4 .局限性：6号标准晶以上的结果为非线性的，根据此标准曲段无法得到精确的结果.结果判断与分析k仪器伯：于波长45Onm的前标仪上读取各孔的OD伯2,以吸光度OD曲为双坐标(Y),相应的DEAb标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲找，样品的DF-Ab含Ift可根据火。D值由标准曲线换算出相应的浓度.3、检测伯范出：0-4(M)ngm1.4、Ift感度：IQngZm1.