人军团菌抗体IgALPAbIgAELISA试剂盒.docx

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1、人军团抗体IRA（1.FAb1.RA）EIisa试剂盒实验原理本试剂盒应用双抗体央心法测定样M指玩水平.样品包括血清Jk1.浆尿液脑脊液细胞闷体组织等,刖纯化的抗体包被微孔板，制成固和抗体，往包被单抗的微孔中依次加入样品，再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-的标抗体发合物，经过砌帐洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP脚的催化下矮化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品浓度呈正相关.用梅标仅在45Onm波长下测定吸光度（OD值,通过标准曲线计算样品中浓度，或者与CUTOFF（ft相比较，从而判定标本阴阳性.人军团抗体IgA（1.PAbIgA）EIisa试剂盒也成130倍

2、浓缗洗涤液20n1.i瓶2的标试剂6m1.1.瓶3的标包被板12孔8条4样品稀释液6m1.I瓶5显色剂A液6m1.1.IK6显色剂B液6m1.x1.瓶7终止液6m1.I瓶8标准品0.5m1.1.Sfe9标准品硫择液1.5m1.1.瓶10封板膜2张样品收集、处理及保存方法1 .血清：使用不含热原和内毒素的试音，掾作过程中避免任何细脆期激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2 .血浆：EDTA,柠株酸盐或肝素抗凝.3000转离心30分钟取上清.3 .细胞上酒液：30）转离心IO分钟去除颗粒和聚合物.4 .组税匀浆：格殂织加入适Ift生理盐水揭碎.3000转离心10分钟

3、取上消，5 .保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用珏分装，冻存于-20C,避免反更陈融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻.样本要求1 .样本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快诳行实验。若不能马上is行试验，可将标本放于-20C保存，但应谓免反复冻融2 .不能检测含NaN3的样品.因NaN3抑制辣根过氧化物酹的（HRP）活性。人军团抗体IRA（I-PAbIgA）EIisa忧剂盒怪作步骡1 .标准品的稀和；本试剂盒提供版倍标准品一支，用户可按照协货说明书中图表在小试卷中进行稀择.2 .加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及解标试剂,K余各步操作相同）、标准孔、待测样品

4、孔。在陶标包被板上标准品准确加样5（）1.待测样品孔中先加样品稀释液401.然后再加待测样品101.（样M最终稀择度为5倍,加样将样品加于戢标板孔底部，尽以不触及孔壁，轻轻晃动混匀.3 .温机用时板膜封板后置37C温向30分钟.4 .配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸愉水30倍稀择后花用5 .洗涤：小心揭掉封板膜.弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液.静置30秒后弃去,如此里更5次.拍干.6 .加的：每孔加入防标试剂501.,空白孔除外.7 .温育：操作同3。8 .洗涤：操作同九9 .显色：每人先加入显色剂A501.,再加入显色剂B501.轻轻震荡混匀，37C避光显色10分怦.10 .终止：每孔加终止液5

5、01.终止反应（此时蓝色立转黄色）.II,测定；以空白孔调手，45Onm波长依序测域各孔的吸光度（OD伯）.测定应在加终止液后15分钟以内选行计算以标准物的浓度为横坐标，ODtft为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的ODtfI由标准曲税育出相应的浓度：再柒以稀林倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准他戏的11践回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度，再乘以稀择倍数，即为样品的实际浓度，3.0,1.十.2.01.0.0.5oIrIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIstandardsconcentration(X)人军团抗体1.g(I.Pb-1.gE1.isa试剂盒注也

6、事顶1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡I53O分钟后方可使用，脚标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2 .浓洗涤液可能会有结晶析出,稀择时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果.3 .各步加样均应使用加样器,并羟常校对其准确性，以避免试验误差,一次加样时间最好控制在5分神内，如标本数出多，推荐使用川枪加样，4,请耳次测定的同时整标准曲线，最好做发孔。如标本中待测物旗含过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值,讲先用样品稀择液稀择一定倍数n倍)后再测定计尊时请最后乘以总桶择倍数(XnK5).5 .封板膜只限一次性使用，以渣免交叉污染。6 .底物清避光保存。7 .严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以陆标仪读数为准.8 .所有样品，洗涤液和各种废弃物祐应按传染物处埋.9 .本试剂不同批号俎分不得混用。10 .保存11 .有效期：6个月