酶联免疫法检测登革病毒 NS1 抗原标准操作程序.docx

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1、彝联免疫法检测登革病毒NSI抗原标准操作程序I目的的联免疫法检测患者血清中登革病毒NS1.抗原。2适用箱SI适用于患者血清或血浆中登革热病蠹NS1.抗原的快速检测。3实验前准备3.1核对被检样品（血清或血浆患者的姓名、编号及检测项目等。3.2检测前应将待测样品置于2-8C冰箱或冰上。4检测项目及参数本方法检测项目为检测血清或血浆中登革热病毒抗原。5检测仪器设备和材料加样器、温箱、洗板机、含波长450nm的陶标仪、登革.病毒抗原检测试剂盒（海联免疫法）（万泰公司）6检潴的环境条件生物安全二级实验室（BS1.-2）中进行,灭活后样本在生物安全一级实验室（BS1.-I）内进行。7操作步7.1 将试剂

2、盒在冰箱中取出，放置室温平衡30分钟，使用前将试剂轻轻震荡混匀。7.2 配液：将试剂盒中浓缩洗涤液用蒸储水20倍稀释。7.3 编号：将样品对应微孔板编号，每板设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔7.4 加稀释液：每孔加稀糅液501.,空白孔除外。7.5加样:分别在相应孔加入待测样品或阴阳性对照各501.,空白孔除外。7.6 温自：用封板膜封板后，置37温育60分钟。7.7 年孔加陶标试剂501.,空白孔除外，轻轻震荡混匀。7.8 温育：用封板膜封板后，置37C温育30分钟。7.9 洗板：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次发垃扣干。7.10 显色：每孔加入显色剂A、B液各5（1.,

3、轻轻震荡混匀，37C避光显色15分钟.7.11 测定：每孔加终止液504八10分钟内测定结果。设定椀标仪波长于450nm处（建议使用双波长45OnnV60065Onm检测），用空白孔调零后测定各孔A值。结果判定8临界值计弟：临界值=0.10+阴性对照孔A值均值（阴性对照孔A值低于0.05各以（）.05计算）。8.2 阴性对照的正常值范围：阴性对解孔A01.（若I孔A大丁OI应舍用若两孔或两孔以上阴性对照大于0.1，应重发实验）。8.3 阳性对照正常值范围：A（）.8.8.4 阳性判定：样品A值临界值者为登革病毒抗原阳性。8.5 阴性判定：样品A值临界值者为登革病毒抗原阴性。9意义结合临床信息，阳性结果可以诊断为登革病毒感染，但阴性结果并不揖除登革病毒感染的可能。