HE染色步骤.docx

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1、常筑HE染色步莪(1)二甲苯(I)5-10min(2)二甲苯（三）5-10min95%乙醉(I)1-3min(4) 95%乙醇(11)1-3min(5) 80%乙醉1min(6)蒸锵水1min(7)苏木精液染色5-15min(8)流水稍洗去苏木精液1-3s(9)1%盐酸乙薛1-3s(IO)稍水洗10-3OS(ID促蓝液返蓝10-30s(12)流水冲洗10-15min(13)蒸慵水过洗1-2s(14)0.5%曙红液染色1-3min(15)蒸饷水稍洗1-2s(16) 80%乙砰稍洗1-2s(17) 95%乙醉(I)3-5min(18) 95%乙砰(11)3-5min(19)无水乙醉5-10min(

2、20)无水乙醇5-10min(21)二甲苯(I)3-5min(23)二甲苯(In)(24)中性树胶封固结果：细胞浆红色，细胞核蓝紫色。转：常规HE染色步歌(1)二甲苯(I)二甲苯(11)95%乙醉(I)(4) 95%乙醉(11)(5) 80%乙醉(6)蒸慵水(7)苏木精液染色(8)流水稍洗去苏木精液(9)1%盐酸乙醇(12)流水冲洗3-5min5-10min5-10min1-3min1-3min1min1min5-15min1-3s1-3s20-30min1-2s(13)蒸储水过洗(14)0.5%曙红液染色1-3min(15)蒸储水梢洗1-2S(16)80%乙醇梢洗1-2s(17)95%乙醉(

3、I)2-3s(18)95%乙醉（三）3-5s(19)无水乙醇5-10min(20)石炭酸二甲苯无水乙醉5-10min(21)二甲苯(I)2min(22)二甲苯(11)2min(23)二甲苯(In)2min(24)中性树胶封固注：第(10)、(11)步可省去，(12)步冲水时间需延长至20-30mino第(20)步假如不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醉。1.取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，4m切片。2 .切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醉至水洗：二甲苯(I)5min二甲苯(U)5min100%乙醇2min-95%的乙醉IminT80%乙醉Imin-75%乙醉Imin蒸慵水洗2min。（各两次，然

4、后把水吸干）3 .苏木素染色5min,自来水冲洗。（吸干水）4 .盐酸乙醇分化30s（提插数产）。5 .自来水浸泡15min或温水（约50C）5min。（吸干水）6 .置伊红液2min7 .常规脱水，透亮，封片：95%乙醉（I）min-95%乙醉（U）Imin-Io0%乙器（I）Imin100%乙醇（11）Iminf二甲基石碳酸（3:1）Imin（省略）二甲苯（I）Imin二甲苯（U）IminT中性树脂封固。HE染色步H一、HE染液的配制：1、HarriS苏木素：称取苏木素精Ig一辄化汞0.5g硫酸铝钾20g量取无水乙醉IOml蒸慵水200ml苏木素溶于无水乙砰，钾明机溶于蒸储水，二者混合后煮

5、沸，离火，加入氧化汞，用玻棒搅拌，试剂变为深紫色，马上移入冷水快速冷却，静置一夜，过渡，棕色小磨口试剂瓶密封保存。运用前加入5%冰乙酸4ml（或冰乙酸3滴）。2、0.5%伊红（水溶性）：称取伊红0.5g肽取95%乙醉25ml蒸储水75ml先取少量蒸储水加入伊红，用破棒将伊红碾碎并搅溶，再加入全部蒸混水，完全溶解后，再加入乙醉，最终加入冰乙酸1滴。白色小磨口试剂瓶密封保存。3、1%盐酸水溶液：盐酸3ml蒸储水297ml混匀，白色试剂瓶保存。4、中性树胶封片剂：往125ml棕色滴瓶中倒入中性树胶若干，加入二甲革适量用吸管调勾，有肯定粘稠度即可。试剂二甲苯1瓶Harris苏木素染液无水乙醉2瓶1%盐

6、酸水溶液95%乙爵2瓶05%伊红（水溶性）染液中性树胶封片剂二、染色步骤1、电吹风吹片或烤片，至溶蜡；2、入二甲苯2）中脱蜡5分钟,用吸水纸吸干液体；3、入二甲苯（II）中脱蜡10分钟（切片透亮），用吸水纸吸干液体;4、入100%乙醇（I）5分钟，用吸水纸吸干液体；5、入100%乙酯（II）5分钟，用吸水纸吸干液体；6、入95%乙醇3分钟；7、入流水2分钟，用吸水纸吸干水分；8、HarriS苏木素染色48分钟；9、自来水梢洗；】0、1%盐酸水溶液分化510秒（切片由蓝变红）；11、自来水洗返蓝1530分钟;12、05%伊红(水溶性)染色30秒1分13、95%乙醉(I)脱水5分钟，用吸水纸吸干液体；14、95%乙醉(II)5分钟，用吸水纸吸干液体；15、入100%乙醉(I)5分钟，用吸水纸吸干液体；16、入100%乙醉(11)2分钟，用吸水纸吸干液体；17、入二甲苯(I)中透亮2-3分钟，用吸水纸吸干液体；18、入二甲苯(II)中透亮5分钟；19、中性树胶封片。20、镜下视察结果：细胞核深蓝色，胞浆与纤维组织呈深浅不等的红色。三、留意事项1、苏木索染色时间应依据染液的藤新或陈旧、与着色力确定C2、盐酸分化要恰当，分化不足，会核、浆共染，分化过度会造成核染色过浅。3、水洗蓝化时间应充分，以防褪色。4、封片后，玻片应与时贴上标签并写上编号。