高效液相色谱-串联质谱法测定人血清中5种抗真菌药物及相关代谢产物的测量方法.docx

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1、背景介绍近年来协若医学技术的不断发展，器官移植、骨轴移植、虫症感染的患行逐年增多,发生侵袭性真菌染和抗菌药物的耐药率迅速上升，建类抗JX菜药物成为临床应用朵广泛的抗菌药物之一,但一些抗真曲药物在个体内和个体间存在较大的个体变异在治疗过程中患者体内的药物浓度可能会“因人而异”，因此对其迸行血药浓度监测具有彼床.痣义。本文阐述了一种能够同时检测多种抗真菌药物的方法,能够带助临床准确定患者体内的抗直的药物浓度，避免出现用药不足或用约过小而导致的副反应.文章亮点Ol.建立/一种1.C-MS/MS法检测人m消中5种抗真菌药物及2种代谢产物的血药浓度的方法：02.对该方法进行了性能验证，该方法准确度好.精

2、密度高,基质效应小：03.研究了种能筋使多种抗直能的物稳定的舰侦配方，病毒和微生物憎染风险小，为实现临床检测提供基础.内容介绍1实Ift部分1.1 主要仪器与试剂1.2 样品前处埋1.4 溶液的配制标准储在液的配制：准确称取道MVRc、VN0、PCZ、ICZ、HICZ.FCZ.CPF标准AA-用甲醇分别溶解并配制成浓度为1mg/m1.的标准储备液.分别移取不同体枳的储备液于同一容量腋中，配制成混合标准溶液.储备液于-80寸冰箱中保存，混合标准溶液于-20C冰箱中保存.1.5 定量方法采用空白基质加标做曲线，同位素内标法定量，样本与基质匹配标准品、质控物样本一同处理后进样，用仪器自带软件绘制标准

3、曲线并定量。2结果与讨论2.1样品前处理方法的建立通过对血液样本进行蛋白沉淀后，井时上清液进行输择。稀科后能够然少样品中杂质成分进入检测器对分析物产生干扰，同时减少基肪效应的产生，但稀株液的种类影响目标分析物的枪定性。图1泊沙米雁用不同稀杯剂稀杯后48h的响应FIgJKcsponscofprisarcnaznicdilutedwithcliffcrmtjMlvmtsin48h为改善分禹度和修形,本方法通过改变流动相的PH来改善.采用5mmo1.1.乙酸t-0.1%甲酸的水溶液为流动相A,0.1%的甲酸乙肪溶液为流动相B,添加乙酸筱是为了增加响应较低的伊曲康哇和羟基伊曲康哇的灵敏度：选择添加甲酸

4、,是为了改善卡泊芬冲的色谱峰形.在A相和B相中同时添加同浓度的甲酸，是为了保证在A相和B相任您比例混合时，始终保证体系在相同的酸低度下进行分离.色谱分析更稳定.图2中a为流动相中未加酸的卡泊芬净的色i普岬，b为流动相中而加甲酸后的卡泊芬净的色谱峰,由图可知，添加甲酸可改善卡泊芬净的峰形.*.kr1MnEnMm2g-Trczsii*-2.3 基质匹配标准品和质控物基质的考察由于葩质的添加，标准品和质控物的稔定性存在定问题，图4为不加任何稳定剂的两种浓度的标准品加速结果，伏立康理氯氧化物、伊曲康哇等响应降低.IMdJvacWFCZKlIlKXFCZ1.tf*TJA*fv9$第GMNt3标TU,貂*

5、F,9Jelib./.IifrM-HMU4nI.SljZ2.4 相对基质效应考察基质效应是指基质成分和目标化合物在进行肉F化时,因相互竞争而导致目标化合物信%；强度有不同程度增强或M弱的现象，标准曲践Iii分析物的艇质不I可时，应该进行携质效应IffAo因此，评估基质效应是1.C-MS方法脸证的关键处或部分“叫采用混合实验的方法.对木方法的相对基烦效应进行评估。2.5 线性考察通过向空白人血清中添加一定浓度的混介标准溶液制成低的样本SI和高值样本S7,将SI和S7按不同比例混合M制成线性样本S2S6.每个浓度点按照1.2方法重更测定3次.分别疗出每个浓度点测定结果的均值，以稀择浓度为臼变I也以

6、测定结果均值为因变瓜求出多项式回归方程,计算相关系数R，通过向已知浓度人曲清样本中添加混合标准溶液,测定加标刚攵率,来评砧方法的准确度。2.7 精密度考察通过向空白人血清样本中添加混介标准溶液,配制成低、中、裔3个浓度的精密度样本，每个浓度制备5个平行样,按照1.2方法测定.考察批内精密度,上述样本重任制作并测定3d,考察批间精密度.结果表明，本方法有良好的精密度。3结论本文建立了种能鲂同时检测人1清中5种抗真菌药物及其代谢产物的HP1.C-MS1MS方法，方法简使，以同位素为内标，准确度而，基质几配标准品和质控物稳定，能终用于临床对伏立康哇、伏立康哇赳氧化物泊沙康曜、伊曲康喋、羟基伊曲康喋、斌康畦、卡泊芬净的药物浓度监测.以及时调整患芥的药物剂量及避免副反应的发生。