【征求意见稿】液相色谱-质谱联用用于脂溶性维生素检测通用技术要求 20240529.docx

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1、ICS11.100CCSC5OT团体标准TCITSXXXX-2024液相色谱-质谱联用用于脂溶性维生素检测通用技术要求GeneraItechnicalrequirementsformeasurementoffat-solublevitaminbyIiquidchromatography-massspectrometry2024-XX-XX实施（征求意见稿）2024-XX-XX发布中国检验检测学会发布前言Ill1范阚12规范性引用文件13术语和定义14符号与缩珞语5实验基本要求5. 1实验室基本要求5.2 人员要求5.3 1.C-MS/MS设备的基本要求5.4 样品来集、运输和存储要求5. 5试

2、剂和耗材6方法学建立6. 1慨述6.2标准溶液和内标溶液的选择7方法学验证7.1 精密度脸证7.2 正确度评价7.3 F，|收实验57.4 线性57.5 可报告范围57.6 定量下限67.7 参考区间/切点67.8 选择性或特异性67.9 携带污染率67.10 10基质效应67.11 11可比性验证78质量管理77.12 1室内质控78.2 室同版fit评价88.3 3其它质量保证和侦量控制措施88.4 系统适用性测试88.5 双空白及单空白样品检测89结果报告8附录A（资料性方法学性能验证参数9附录B（资料性）血湎脂溶性维生索液相色谱串联质谱法（液液萃取方法）10参考文献13II-1.Z-k

3、刖S本文件按照GB/T1.1-2020E标准化工作导期第1部分；标准化文件的结构和起笔规则3的规定起草。本文件的某些内容可能会涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的贲住.本文件由提出.木文件由中国检验检测学会归口。本文件起草单位：本文件主要起草人：.IlI液相色谱-质谱联用用于脂溶性维生素检测通用技术要求1葩困本文件规定了采用液相色谙-质i,联用技术开展脂溶性维牛.泰(包括25拄基维牛.素D3(25OHD3)、25龄基维生素【)2(250HD2)、-生育酚(VE)、视黄酹(YA)、叶绿基甲琴段(VKl)检测的实名基本婆求、分析前准备、方法学建立和验证、质量管理、结果报告的技术要求.本文件适用

4、于采用液相色谱-质港联用技术开展脂溶性处生素被涮方法的建立、验证和运行过程的质域管理、实验室自建方法开发及相关试剂盒研发。2规危性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款，其中，注Fl期的引用文件.仅该H期对应的版本适用于本文件：不注H期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T2M69临床实验室设计总则YY/T1740.1医用质谱仪第1部分：液相色谱-侦谱联用仪3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。液相色谱串联质谱liquidchromatographytandemmassspectrometry；1.C-MSZMS一种联合液相色i普和质

5、谱分析的检测技术，结合了色谱对物质的高分离能力和质谱对物质结构和质量的分析能力,具有高选择性、高特异性以及高灵敏度的特点内标internalstandard;IS在定址分析时加入到试样中能与所有组分完全分离的已知量的化介物来源：WS/T4782015,3.1基质效应matrixeffect被测麻以外的某种样M特性对被刈hi的伯的影响.来源：WS/T356-2011,2.2线性范围Iinearrange使实验系统的最终分析结果为可接受的浅性的浓度范例，此时非爱性误差应低于允许误差.【来源：WS/T108-2012,2.3测量至复性measurementrepatabiIity重更性reeatab

6、ility在一组取更性测知条件下的测吊精密度。：WS/T492-2016.2.2测量精密度measurementprecision精密度在规定条件下，对同一或类似被刈对.蜕测JIt所得示值或测得间的一致程度.注1：汨果精密度曲常川不稻滔猊或以数字形式表示.如在规定测ht条件下的标都僚里、方整或变异系数.注2：规定条件可以是通爱性31条件、期同精密度测量条件或现现性测Ht条件.注3：冽M格留吱用定义罚1IbIl2性、期间科Irt精密度成测M乂现性，注4：“裆鼠精利度一不等同十“测域准胡收一.I来源：WS/T492-2016.2.3检出限Iimitofdetection由给定测收程序获得的测定值，

7、其泮称的物质成分不存在的误判概率为。，声称物短成分存在的误判概率为。注1：国际理论和应用化学联合公(IUPAC)推和B的默认次为0.5.注2有时使川缩写诃IJO0.【来源：JJF1001-2011,定义7.18定量限Iimitofquantification在规定的测量条件下以指定的测取不确定度测凝的样品中可被测收的最大伯“来源：GB/T29791.1-2013,A.3.44测量正确度measurementtreness,treessofmeasurement正确度trueness无穷多次重更测量所得fit值的平均值与一个参考量值间的一致程度.注1：式量止碇收与系统测盘设与有关.与的机测盘误差

8、无关.注2：“潮量正确度-不能用”利量/确度”表示.繁殖亦花.注3：正砒憧通常以偏前去示.携带污染carryover反应混合物中不属于它的材料的引入。来源：GB/T29791.12003,定义A.3.83. 11系统适用性测试systemsuitabiIitytests；SST一种确保1.C-MS在方法开发验证之后，在实际检测过程中能够监测仪器性能状态的质疑控制手段，目的是判断仪器是否处于正常检测状态。4. 12脂溶性维生素fat-solublevitamins；FSV脂溶性维生素是不溶于水而溶于脂肪及北极性有机溶剂的一类维生素，包括维生素A、推生素D、维生素E、维生素K等。注：4、文件涉及的

9、垢溶性堆生索只包乩25Ji基旌生素也、25雅培维生招0.生育酎*WWW.叶馍A甲票tu.4符号与缩略语下列符号与缩略语适用于本文件.250HD3；25羟雉生素D3(25-HydroXyVilanlinD3250HD2：25羟基维生索D2(25-HydrOXyviIamiUD2)VE：-生育的(vitaminE)VA：视黄醉(YitaeinA)VK1：叶绿她甲沫酸(vitaminKDESh电喷雾电离桢式(Eloctrosprayionization)APCI：大气压化学电离模式(Atmosphericpressurechemicalionization)5实验基本要求5.1 实验室基本要求从犷脂

10、溶性维生素检测的实验室应符合GBZT20469的要求，实验室环境条件符合YYZT17W.1的要求。5.2 人员要求实验空技术人员应具备医学楼骁、分析化学、药学、生物化学等相关教仲背景或工作经历，经培训、考核合格后上岗.5.3 1.C-MS/MS设备的基本要求1.C-MSZMS设在应符合YY/T17-10.1的要求。5.4 样品采集、运输和存储要求5.4.1样品采集样品采集应注感以下W项：a)应讨估所使用的果样管中有无目标脂溶性维生素的干扰：T/CITSXXXX-2024b）一般情况下.脂溶性维生素检测宜用新鲜或冰冻血清样本，54.2样品运输样本采集后应2h内常温送达实5金室,离心检测.如外送样

11、本.建议内心后,分为IM西沐浴尽快送检.54.3样品的保存新辟样本若不立即检测,应放于21C8X:避光保存.保存时间不超过Md.20C及以下可稳定保存30d.55试剂和耗材试剂和耗材的选择一般应满足下列要求：a）进入色谱鲂诙的试剂应至少选择色洒级试剂，并按产品说明书要求保存和使用：b）实骁过程中所用水应为和纯水：C）应考虑耗材如样品采集管、加样枪头、离心管、多孔板等对检测的影响：d）更换试剂耗材的种类或批号时宜进行批间5金证.6方法学建立1.1 概述分析前，应评估目标分析物现彳j检测方法的局限性以及选择1.C-MSZMS检测的必要性，根据制要建立单种或多种脂溶性维生泰联合检测的方法。1.2 标

12、准溶液和内标溶液的选择6. 2.1标准品纯度应H98.5%推荐使用有证参考物质。7. 2.2同位素标记物质推荐使用非放射性稳定同位素3H,130标记物作为内标（IS）,且其相对分子侦艰与目标分析物质荷比相差宜3,IS纯度宜Z984IS的选择一般应满足下列要求：a）应选择样从中不存在的非内源性物质，IS应具有与目标分析物相似的理化特征和相似的色诺保用时间：b）推荐使用非放射性稳定同位素标记物作为IS.H.其相对分子侦量与目标分析物质荷比相差宜N3.标记纯度宜98%：c）应选择合适浓度的IS,获得适宜的信号强度,以保证检测方法的正确度、相密度和线性：IS中杂质（如未标记的化合物）应不影响最低定m限

13、样品的测定。7方法学验证71精密度验证依据临床实5金室标准化委员会(CliniCaland1.aboratoryStandardsInstitute.C1.SI)EP15A3文件，选取低、中、高三个浓度样本，每天5次，连续5天检测.评估充电性、实脸室内精密度.精的度的接受标准宜为允许总误差的1/2.由友性CVW12.5&总不相密度CV12.5%。（国家卫生健康委临床检脸中心维生泰D全国室间质量评价（exlcrnalqualityassess三cnl.EQ）计划允许总误差25%的2作为可接受范围.方法学性能验证参数见附录A.1.2 正谈度评价宜按照有证参考物质、正确度5金证室间质评样品、正确度质

14、控品的优先顺序选用参考物版进行正确度评价及偏倚评估：正确度评价结果应在靶（ft&3%范围内.1.3 回收实验回收实5金宜按照以下程序进行验证：a）配制标准溶液，以已知浓度样本作为原始样本,原始样本中加入不同浓度的标准溶液，其加入体积宜少于总体积的10%。制备至少3个浓度水平的样品；b）短个样品至少重或测定6次：c）按照公式1）计算回收率,回收率应介于85115%之间.嗑赛历式中：。一回收率：C-加标样测定浓度（均值）：门一加标样总体积：所原始样本测定浓度（均值）：U1.加标样中原始样本体积：Cs-能制浓度.1.4 线性线性按照以下程序进行脸证：a）标准曲线应至少包括6个浓度水平标准品：b）在标

15、示线性范国内，性格关系数应0.99；O考察不同天内至少3个独立批的校准曲线，定价卜限的回算浓度应在标示浓度的20%以内,其他水平应在标示浓度的15%以内.至少行75%的标准曲线样品且至少6个浓度水平应符合上述标准.1.5 可报告范围可报告范阳5金证包括可报告低限（定量下限）与可报告高限（定敢上限X样品最大稀择倍数）.柿糅的验证按下述程序进行：a）应使用与临床样品类型相似的空臼菸质，时薪定砧上限浓度的样品进行桶择骁证；b）应按公式（2）泅售偏倚：年（rd-4）o（2）式中：假借：C-测定浓度（均值）：Q稀择倍数：G理论浓度。注：该僚佝宜W1.5%.c）每个稀拜四干至少5个平行样品,不精密度CYWI5%