p53、p27及mdm2在胃肠道间质瘤中的表达_0.docx

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1、P53、p27及mdm2在胃肠道间质瘤中的表达P53、p27及mdn2在胃肠道间质描中的表达作者：李红伟纪祥瑞赵洁丁力王建伟【摘要】目的探讨P53、p27和ndn2蛋白在胃肠道间质瘤(GIST)中的表达及其与GIST生物学行为的关系，为预料该肿瘤的侵袭潜能供应理论依据和可能的预料指标。方法收集68例手术切除的GIST标本,应用免疫组织化学法检测肿瘤组织中P53、p27和ndm2蛋白的表达，井结合病理形态学及生物学行为评价进行统计学分析。结果68例GlST中P53、p27和mdm2蛋白阳性表达率分别为75%.54.4遇和27.94%op53阳性表达率在极低度侵袭危急性(V1.R).低度侵袭危急性

2、(1.R)和高度侵袭危急性(HR)组三组间，细胞核分裂数10/50HPF和10/50HPF两组间的差别均有统计学意义(P0.05),在肿痛直径5cm和5cm两组间差异有高度统计学意义(PV0.01)：p27阳性表达率在V1.R、1.R和HR组间比较有统计学意义(PV0.05),在肿瘤直径5cm和5cm两组间差别有高度统计学意义(P0.01)；mdn2阳性表达率在细胞核分裂数10/50HPF和10/50HPF两组间比较差别有统计学意义(P0.05)结论P53、p27和mdn2蛋白表达与GIST的发生、发展有关，检测P53、p27及mdm2表达可以作为GIST生物学行为评价的有效指标。【关键词】胃

3、肠道间质瘤：p53；p27；mdm2；免疫组织化学【AbstractObjectiveToinvestigatetheexpressionofpSB,p27andmdm2proteiningastrointestinalstroma1tumor(GIST),anddiScussthcrelationshipbetweentheirexpressionandc1incopatIiologicalcharacteristics.McthodsInimunohiStochcmicalstainingwasusedtodeteettheexpressionofp53,p27andmdm2in68cas

4、esofGIST.TheirrelationswithhistomorphoIogyandbiologicalbchaviorwereana1yzedstatistically.ResultsIn68casesGIST,thepositivityofp53,p27andmdm2proteinwere75%,54.4l%and27.9zl%respectively.TheexpressionofpsBproteinwasinverselycorrelatedwiththefletchcrdegree,morphologicvariant(P0.05)andtumordiameter(PO.01)

5、ofGIST.Theexpressionofp27proteinwasinverselycorrelatedwiththefletcIierdegree(PO.05)andtumordiameterofGIST(PO.01).Theexpressionofmdm2proteinwasinverse1ycorre1atedwithlhcmorpIiologicvariant(PO.01)ofGIST.Conc1usiOnThesedatashowstheexpressionofp53,p27andmdm2arereIatedtotheontogenesiSandprogressionofG1ST

6、.p53p27andmdm2maybcprognosticindicatorsinGIST.Keywordsgastrointestinalstromaltumor,p53.p27,mdm2,immunohistochemistryp53是目前探讨最为广泛深化的抑癌基因之一，而mdm2为近几年发觉的一种（小鼠）双微体癌基因，二者表达的相关性日益受到关注。p27属CDKI基因（细胞周期素依鸵性激酶抑制剂）,是CDK的负性调控因子，也是一种抑癌基因。CDKI其蛋白的低表达与多种肿瘤的不良预后亲密相关。胃肠道间质瘤（GIST）是一种并非少见、特征为CKIT突变阳性的间叶源性肿瘤，它主要发生在胃肠道，

7、但也可发生在其他腹腔盆腔部位，其临床生物学行为表现困难，部分呈明显良性过程,部分呈确定的恶性表现。有关P53、p27及mdm2在GIST中的表达，目前国内少见报道。因此，检测GIST中P53、p27及mdm2的蛋白表达，分析其与临床病理特征的关系，了解P53、p27及mdm2在GIST发生、发展中的有指导作用。1材料与方法1.1材料来源收集青岛高校医学院附属医院病理科20052008年手术切除的GIST肿瘤组织蜡块共68例，临床和病理资料完整：其中男32例（47.06%）,女36例（52.94%）,中位年龄59.8岁（33103岁）；病变部位分布：胃34例（50%）,肠20例（29.41%）,

8、其他14例（20.59%）O肿瘤直径大于5cm34例（50%）,小于5cm者34例（50%）：按组织学分型:梭形细胞型50例(73.52%),上皮样细胞型9例(13.24%),混合细胞型9例(13.24%)；按肿瘤核分裂像数10/50HPF55例(80.88%),核分裂像数10/50HpFI3例(19.12%)按Fletcher分级标准1,7例(10.29%)为极低度侵袭危急性(V1.R)、20例(29.41$)为低度侵袭危急性(1.R)、14例(20.59%)为中度侵袭危急性(IR)、27例(39.71蛤为高度侵袭危急性(HR)e全部组织标本均经10%中性福尔马林固定、石蜡包埋、制成4m厚连

9、续切片4张：常规苏木素伊红染色1张：P53、p27及mdm2免疫组织化学染色3张。选取15例取H胃肠道肿瘤大体标本肿瘤远端组织作为正常比照组。1.2免疫组化试剂来源及染色方法鼠抗人p53单克隆抗体工作液、鼠抗人p27蛋白单克隆抗体工作液、鼠抗人mdm2单克隆抗体原液0.1ml、PV二步法检测试剂盒及DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。采纳PV法进行免疫组化染色，用已知阳性片和磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗分别作为阳性和阴性比照。P53、p27及mdm2免疫组化试验均需热修复，mdm2免疫组化试验一抗浓度1：10001.3结果判定标准p53和p27蛋白在GIST的表达定位于肿瘤细

10、胞的细胞核，mdm2蛋白的表达定位于肿瘤细胞的细胞核和细胞浆。出现棕黄色颗粒或弥漫的棕黄色为阳性细胞。记分参照RemmeleandStegnerde的IRS（Immunoreactivescore）法2,即3个参数半定量计数方法：依据染色强度、阳性细胞数和两者计分的乘积进行推断，分为阴性一、弱阳性+、中强阳性+、强阳性+。每张切片随机选取10个高倍镜视野，计数阳性细胞数：阳性细胞数居为0分：阳性细胞数6%25%为1分；阳性细胞数26%50%为2分；阳性细胞数51%75%为3分：阳性细胞数75%为4分。阳性细胞的着色强度：淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。两积分相乘，0分为阴性（一），14

11、分为弱阳性（+）,58分为中度阳性（+）,912分为强阳性（+）。1. 4统计学分析免疫组化结果采纳SPSSll.5统计学软件进行数据处理，采纳卡方检验，校正卡方检验及精确检验法分析P53、p27及mdm2蛋白表达与GIST临床病理指标的关系。PVO.05表示差别有统计学意义。2. 结果2.IP53、p27及mdm2蛋白表达68例GISTp53阳性者51例（75%）,p27阳性者37例（54.41%）,mdm2蛋白表达阳性者19例(27.94%).在比照组中，p27蛋白表达阳性率为93.33%(14/15),p53和mdm2均呈阴性表达。p53和mdm2在GIST中的表达阳性率显著高于比照组(

12、P0.01；P0.05),p27在GIST中的表达阳性率显著低于正常比照组(PV0.01)免疫组化结果见图13。3. 2p53、p27及mdm2蛋白表达与临床、病理特征的关系。2.2.Ip53与GIST临床病理特征的关系：68例中，p53阳性表达率在GIST的Fletcher分级中，其V1.R1.R组分别与HR组比较差异有统计学意义(P5cm两组的阳性率分别为58.82%和91.18%,差别有高度统计学意义(PV0.01)(表1)；细胞核分裂数10/50HPF和10/50HPF两组的阳性率分别是69.09%和100%,差别有统计学意义(P005):与肿瘤的组织学分型，部位和有无坏死的差别无统计

13、学意义(P0.05)。2.2.2p27与GIST临床病理特征的关系：68例中，p27阳性表达率随肿瘤侵袭危急程度的增加而有降低的趋势，其V1.R和1.R组分别与HR组比较差异均有统计学意义(P5cm两组的阳性率分别为70.59%和38.24%,两组比较差异有高度统计学意义(P0.05)；与肿瘤的组织学分型、核分裂像数目、部位和有无坏死的差别均无统计学意义(P0.05)o表IP53、p27及mdm2表达与肿瘤直径和核分裂像的关系p53阳性阴性Pp27阳性阴性Pmdm2阳性阴性2.2.3mdm2与GIST临床病理特征的关系：68例中，ndm2阳性表达率在细胞核分裂数10/50HIT和10/50HP

14、F两组的比较差异有统计学意义(P0.05)；mdm2的表达在GIST的Fletcher分级，肿瘤的组织学分型、部位和有无坏死的差别均无统计学意义(P0.05)。3探讨p53是迄今为止发觉的与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因，50%以上的人类肿瘤都检测到p53基因的突变。野生型p53基因为肿瘤抑制因子，突变型p53则具有癌基因活性。野生型p53蛋白分子的半衰期短，不易检测。由异样(突变型)p53基因编码的突变型p53蛋白有较长的半衰期，简单通过免疫组化检测到。本探讨结果显示，p53蛋白在GIST中的表达明显高于在正常比照组中的表达（P0.01）,表明p53基因突变及其产物的积累与GIST的发生关系亲

15、密。P53蛋白表达在极低度侵袭危急性（V1.R）GIST和低度侵袭危急性（1.R）GIST的表达均低于高度侵袭危急性（HR）GlST的表达,其阳性表达率随肿瘤侵袭危急程度的增加而有上升的趋势，这与Gumurdulu等3的探讨结果相同，此结果表明，伴随GISTFletcher分级上升，p53表达也上升，突变型p53基因失去原有的生长抑制功能，获得增殖、转化和致痛潜能，其高表达可以促进GIST细胞的增殖和恶性转化，提示p53基因突变在肿瘤细胞恶性进展中起确定作用，有可能成为临床判定GlST风险程度分级的重要参考指标。同时，p53在不同核分裂像数和不同大小的GIST中表达有差别，核分裂像数和肿瘤直径是公认的推断GIST良恶性的指标，因此，我们认为p53可以作为推断其良恶性的牢靠指标。p27属CDKI基因（细胞周期素依竟性激酶抑制剂），是CD