WST 491—2024梅毒非特异性抗体检测指南.docx

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1、ICSI1.020CCSC50WS中华人民共和国卫生行业标准WS/T4912024代IiWST4912016梅毒非特异性抗体检测指南Guidelineofnon-treponemaltestsforsyphilis2024-05-09发布2024-11-01实施中华人民共和国国家卫生健康委员会发布本标准为推荐性标准.本标准代替器/1912016梅毒非特异性抗体检测操作指南.与ST491-2O16相比，除结构调整和编辑性改动外.主要技术变化如下：一一增加了规范性引用文件（见第2聿）;一一埴加了术语和定义中“酋带现象”和“黄-树反陶”（见3.1和3.2）；一一地加了水平旋转仪中“冏定反应程序”（见

2、7.1.1.3;增加了实验操作步器中“肺有液标本的检测”（见8.3.4和8.3.5）一一增加了报告格式概述、质峡控制概述（见9.3和10）；一一增加了临床意义中“检测策略”（见llD:一一增加了附录C水平旋转仪关键技术参数等（见附录C）;-更改/标本采象和标本处理的部分条款（见第6章，见2016年版的第7章）：一一删除了缗略语中转速条款（见2016年版的第4章）.本标准由国家卫生健康标掂委员会嗨床检验标准专业委外会鱼货技术审查和技术咨询，由国家卫生健康委医疗管理服务指导中心负交协调性和格式审查，由国家卫生.ft!康委员会医政司负责业务管理、法现司负费统筹管理.本标准起草单位:1：海市皮肤病医院

3、、Sl且大学附属中山医院、厦门大学附属中山医院、华中科技大学同济Iii学院附属同济医院、上海市临床检晚中心、四川大学华西Iii院、中国人民解放军空军军次人学附园第医院、中国疾病预防控制中心性病控IM中心、北京大学第医院、中国医科大学附典第,医院.本标准主要起草人：顾侪呜、郭坤、杨天蜴、孙自浦、王庆忠、向传帔、刘家云、尹跃平、冯珍如、赵敏.本标本于2016年首次发布,本次为第次修订.vdri.:性病研究实验室实物(VenerealDiseaseResearch1.aboratorytest)RPR：快速血浆反应素.环状卡片实验(RapidPlasaaReaginCircleCardtest)ED

4、TA：乙二胺四乙酸(EthyleneDiamincTciraacciicAcid)TRUST:甲卷胺红不加热血清实验(TOlUidinCRedUnhcatcdScrumtcs)RCT：相对离心率(RelativeCentrifugalForce)CSF:肪Tf液(CerebrospinalFluid)r/min:每分忡转速(RevolutionsPerMinute)Symin:每分钟秒(SecondsPerMinute)SOP:标准操作程序(StandardOperatingProcedure)5枪RlJK与方法5.1 M三宿主感染梅毒鳏旋体后,被摘害的宿主细胞及梅毒螺旋体本身林放的类脂物质,

5、引起宿主产生I9和IgG等抗类脂质抗体.这类抗体在体外与含心璘脂、卵磷脂和胆固肿的抗原溶液发生反应,产生絮状凝集现象.邀集的强弱程度与抗体浓度成正相关,在一定程度上反映梅律螟族体感染宿主的免疫活动状於5.2 方法5.Z1VDR1.商品化试剂盒包含VDR1.抗原、VDR1.畿冲液和说明H,VDR1.抗原是含行心璘脂、卵磷脂和胆固肿的无水乙醇溶液.YDR1.缓冲液含缄化钠、40%甲度(中性)水溶液,陵酸氯二钠和磷酸二级钾的械酸盐溶液，pH=6-00.l.用域冲液新鲜配制的VDR1.抗原工作液与标本中的抗体发生反应.在显微镜下可观察到舞状凝集.6.2.2RPR商品化试剂盒包含抗原、阴性对照晶、阳性对

6、照品、抗原滴针、反应板和说明书。RPR是种改良的VDR1.实验，将VDR1.抗原站令到作为示踪物质的炭颗粒上，当抗Ki与标本中的抗体发生反应，产生肉眼UJ观察到的黑色制状凝尔,RPR抗原溶液中添加氯化胆帆起到化学灭活效果，添加EDTA起到稳定试剂性能的作用。5.2.3TRUST商品化试剂盒包含抗原、阴性时照品、阳性对照品、抗原滴针、反应板和说明1九TRUST的检测原理同RPR,将YDR1.抗原结合到作为示踪物质的甲装胺红染料颗粒上,当抗原与标本中的抗体发生反应，产生肉眼可观察到的红色蟹状凝虬TRUST抗麻溶液中氮化胆碱起到化学灭活效果，添加EDTA起到稳定试剂性能的作用.6林果集和处1&1标本

7、采编和的I6.1.1采集血液标本时，宜使用无添加剂或内壁经珪化处理的直空采集器.6.1.2含有添加剂(促凝剂、抗凝剂)的直空采集器，应在使用前进行抗干扰性能评估(见木标准附录A和附录B).6.1.3采集新鲜全血标本时，不应宜接注入普通照料试管，以免l块收缗不良,6.1.4宜使用洁净、带忐(幅/塞)的坡璃试管收集CSF.注1冰平旋的文技术瑟收应符合本标准用漱的规范.注2:不应使用旋钮式两节装置的水平旋的七注3:不应使用微最振荡纵仪代替水平旋转仪.7.1.2护飘m7.1.2.1 每年至少次对水平旋转仪进行校准，并做好R常保养和维护，保存相应记录.最大允il.%差符合本标it第7.1.1条亶求.7.

8、1.2.2 可自行制定程序化文件进行FI常维护和比时，并保存相关记录.7.2RM7.2.1 RPR/TRUST反应板7.2.1.1 商品化试剂盒中的反陶板上.行若干个直径18mm的反附圆圈.7.X1.2沿反应WIie内例边缘不阴面,防止旋转时液体溢出.7.22VDR1.反应检7.2.2.1 宜使用专用VDR1.反应板进行实验.7.2.2.2 用于血清标本检测的反应板上有克径14仙的反应圆圈,沿同圈边缘的胶漆或陶瓷防溢环可防止旋转时液体溢出，反应孔中间透明，便于直接在显微钺下视察.7.2.2.3 2.2.3I1.lCSF标本检测的反应板上付注径16mm的反应IaIib反应孔中间为深度1.75mm

9、凹面，防止旋转时液体溢出，反应孔中间透明,便于直接在显微镜卜观.察.7.2.2.4使用纸质反应板代替玻璃板进行YDR1.实验时,反应结束后吸取反应液体过我玻片上，攫上蔽玻片，在显微镜卜观察.7.3 微W液7.3.1 本要求7.3.1.1 梅毒非特异性抗体丈幼的准确性依ft于抗原海加量的鞫度.当试剂盒配套的抗原滴针不符合最值标化要求时，宜使用战后移液器。7.3.1.2 宣使用50U1.固定式微Jit移液零.吸取血清、血浆、CSF和无一生理用水.7.3.1.3 HI1移液器吸收和滴加抗原，滴加抗炭量应符合本标准第7.4.2条至第7.4.5条的技术要求，7.3.1.4 定使用精准适圮微量移液8的聚丙

10、烯材料移液吸头，确保良好的密封性：吸头衣面光滑，标木戌窗少，确保质R一致性和结果的血场性。7.3.2 护期m7.3.2.1 捋年至少,次对微双移液器的使用量程进行校席，并做好口常饰护和保养.7.3.2.2 可Ih具右资助的实验室人员按照程序化文件对微Sl移液器进行内部比对,并保存相关记录.7.4 #7.4.1 可采用经过校准的抗原滴针进行实验，7.4.2 RPR,TRUST实验用于血消/血浆检测时，滴针的抑液抗原状是17u1.,或符合59I滴Jm1.的技术要求，7.4.3 RPRZTRUST验用于CSF检测时,淌针的每鳞抗原量是IoH1.,或符合1002滴Jm1.的技术要求。7.4.4 VDR

11、1.实验用于血清检测时.湖针的每湍抗联fit是17M1.或符合591滴Jm1.的技术要求.7.4.5 VDR1.实验用于CSF检测时.滴针的每滴抗原量是I。u1.,或符合1002S5111.的技术要求。8宴”步，8.1应遵照本标准和商品试剂盒说明书,编写SOP.井脸if检测性能疗效.粒测时严格按SoP进行操作.所有实验都应在反应板上做好唯一性标记.&2HPRaKiSr*8.21定性实U/*/CSF程本RPRTRUST定性实验用于梅毒非特异性抗体的检测-操作步骤如下：a）吸取50M.待检也消/血浆/CSF标本、对照品或质控物，每个标本置于直径1811rn反应板上的一个国圈中；b）将标本均匀涂布于

12、整个反应回照内：O滴加抗原前,轻轻煎倒确保抗原混勾，再用滴计轻援地吹吸数次,百至抗原充分悬浮,吸入滴管：d）并去针检中第滴抗晚，从第二法开始向捋个标本圈中滴黑1滴抗原（血清和血浆标本加171.抗原：CSF沐加IlOU原）：e）滴加抗庚后，立刻将反应板忸斜30左右旋转数周,使抗原和标本快速混合：0将反应板固定在水平旋转仪夹恰内，读启动仪瑞的反应程序（100rmin,8min）g）当仪器停止工作后，3min内肉眼观察结果：h）按木标准第9.1条给出的定性实验反应结果的描述作出判断，注1：法布标本时移液喷头与反应板的夹角接近30,避免吸头划破反的板衣而防水涂层.注2：混匀加液时勿剧烈吹吸，保持率直状

13、态，以自由落体方式滴加肮叽勿使用洗针内的第摘和最后滴抗原针管中的抗原余盘不足时，按本标准第8.2IC）项前的2Id）项给出的描述收总株作。注3：实效反应结束应立刻观察，否期液体蒸发后会严小彩向结果判读，注4:定性实验是阳性反应时.应W标本进行怫哎倍比稀样后,进行半定址媛.注5：大样本Itj才燥品.示：采Wrprtkust-血清棚可的实验程序用ItSF檎则，rprtkusr-csf,jvdr1zCSHSS!绪涅的符合率Mi%.在无法f三Vl）R1.试部域该试相殳仃拱棚家药品监督管理忖注:册证的情况下,可彩HRPRECST代WWWHJeFtS!,8.22举定量实J/CSF标本RPR.TRUST半:

14、定局实验用,判定梅港非特异性抗体相对浓度和或）博除前带现象，操作步骤如下：a）吸收50H1.生理盐水,分别加至口径18m反应板上数个连续的Wl圈内：b）吸取50g.待柞血清心卜标本、对照品、质控物，与反应板上第个圆圈内的生理盅水充分混合，稀林过程中，标木与生理盐水应反攵限吸混匀N6次，避免产生气泡，不应将标本吹出反应捌圈：C）吸取第一个倒圈中倍比稀价的标本50U1.,与反应板上第二个BU圈内的生理盐水充分混合；d）及亚吸取前一个圈圈的50M1.稀邰标本与后一个陶圈中生理款水混合的操作，至公后一个生理盐水的同圈充分混合后，吸出501.的柏林标本，弃去：e）从高稀林度往低稀稗度方向，逐一粕稀杼标本

15、均匀地涂满整个Bl圈；D按本标掂第&2.1C）项和第8.2.Id）项给出的描述和步再滴加抗原（血清标本加17U1.抗原：CSF标本IimOU1.抗原）;g）按本标准第8.2.IO项和第8.2.If）项给出的描述和步骤启动反应程序：h）当仪器停止工作后,3min内肉眼观察出现（集反应.对坡高稀程度取聚反应加图的检测结果.以“”或“土”表示（即本标潴第9.1.3条或第9.1.4条反应结果的描述）。注1：半定现实物做到现同性反应的。掇械科慢.注2：半定址实验第例圈的标本满度为1:2;第例圈的标本滴度为1:4;以此类机注1：山腺标本不适合半定属实痣63 VDR1.实Ift64 11EM加*工作液在实验前应新鲜配制VDR1.抗原工作液,愫作步骤如下：a）配制抗原工作液前应测定抗原缓冲液的酸哪度,确保p=6.00.1;b）吸取VDR1.抗原慑冲液0.41.,加入容业为301.的带盖、底部H径35ma的平底玻珊瓶,镀卷慎斜小瓶使VDR1.抗原缓冲液BUfi整个瓶底；O吸取VDR1.抗原0.5111.一边平缓地沿水平方向转动玻璃腌（以180