关于冷沉淀制备方法及质量影响因素.docx

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1、关于冷沉淀制备方法及质量影响因素【关键词】冷沉淀；制备；质量冷沉淀是用新鲜冰冻血浆为原料制备的一种成分血，主要用于血友病甲、血管性血友病、纤维蛋白原缺乏症患者，也可用于手术后出血、严重外伤及DIC等o因冷沉淀中的国因子为不稳定因子，受多种因素影响，所以每袋冷沉淀团因子含量各不相同，现将本中心的冷沉淀制备方法及质量因素影响分析汇报如下。1材料与方法1.1 材料与仪器大容量低温离心机(CrYOFUge6000),日本日立公司生产的速冻冰箱(SanYO),美国Cytotherm公司生产的CT-4T.6C型自动摇摆式恒温水浴溶化箱，日本产SYSMaX(CA-50)凝血因子分析仪，韩国产热合机(SE25

2、0)o1.2 冷沉淀原料浆制备采用费森尤斯卡比(广州)生产的密闭四联袋，采集400ml全血6h内离心分离制成血浆60袋(20010ml),将血浆迅速置-800速冻机内，冻结后置-30团冰箱备用。1.3 制备冷沉淀取60袋血浆置室温中放置3min,待连接两袋的塑料管变软后分两组(A、B)放入低温水浴箱中(406团)，A组30袋用水浴虹吸法制备冷沉淀，B组30袋用快速溶化离心法制备冷沉淀，计时。A组新鲜冰冻血浆融化时固定于恒温摇摆式水浴箱的血袋夹中，垂直浸没于恒温的循环水浴中，水浴箱自动摇摆，血浆溶化，上清液虹吸流入空袋,袋中心剩余(255)ml未溶化的血浆及吸附在上面的冷沉淀。B组新鲜冰冻血浆融

3、化时去掉固定夹，融化过程中人工给力捏碎血浆冰块，血浆溶解到尚存少许冰硝后，用大容量低温离心机离心，温度40,相对离心力3200g,离心20min,分离血浆，袋内存留(255)ml血浆冷沉淀，将A、B组冷沉淀快速置于速冻冰箱中冻结。A组平均用1.2h,B组平均用2.0ho1.4 质量检测用血凝仪对不同方法制备的冷沉淀进行凝血因子回、纤维蛋白原的测定，t检验分析。2结果用相同的溶化设备，采用不同制备方法制备所得冷沉淀质量有差异，见表1。结果显示：快速溶化离心法每袋中凝血因子a80u,纤维蛋白原150mg,符合国家标准，水浴虹吸法凝血因子能80IU,符合国家标准，纤维蛋白原15Omg,不符合国家标准

4、1。表1冷沉淀质量检测结果3影响冷沉淀质量的关键因素冷沉淀制备经历了全血、新鲜冰冻血浆、冷沉淀三个阶段，有些可控，有些不可控，任何一个环节的误差都会影响冷沉淀的质量。3.1 采集个体冷沉淀中凝血因子回、纤维蛋白原的收集率与献血者个体有关。正常个体中凝血因子团水平相差在50%200%之间;与血型有关;O型含量最少，已知服用一些药物如避孕药可增加凝血因子由水平，血管作用肽I-脱氨-8-D精氨酸血管加压素(DDAVP)可增加血循环中凝血因子团水平达300%2o3.2 采集速度血液采集过程中应注意采集速度，要求200ml全血采集时间3min,40Oml全血采集时间6min,如采血不畅，出现凝块及溶血均

5、会影响全血中冷沉淀凝血因子团的含量。3.3 制备过程冷沉淀中的主要成分凝血因子团是一种不稳定的凝血因子，新鲜冰冻血浆的溶化温度直接影响产品质量，在4团6团水浴中溶化回收率较高，在8团以上产生自溶。快速溶化离心法制备冷沉淀的质量优于水浴虹吸法，分析原因，前者在于溶化新冰时人工捏碎血浆冰块，加快溶化速度，再通过低温重离心，使新鲜冰冻血浆中90%的冷沉淀沉淀在浆袋底部，流失少;而水浴虹吸法在虹吸过程中，一部分凝血因子及纤维蛋白原也随血浆进入空袋。4讨论近几年，由于成分输血的大力推广及凝血因子制品的缺乏，我市各医院冷沉淀用量明显增多，不仅用于治疗血友病A,在烧伤外科手术止血、产后大出血、外伤、DlC治疗中起到关键作用。制备冷沉淀时，要控制各环节影响因素，在把握好水浴温度和溶化速度这两个关键点的同时，采用快速溶化离心法制备冷沉淀，临床疗效会更好。