人抗肝细胞胞质1型抗体LC1ELISA试剂盒.docx

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1、人抗肝细胞胞质1型抗体(1.Cl)EIiSa试剂盒实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定样品指标水平。样品包括血清血浆尿液脑脊液细胞固体组织等，用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入样品，再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品浓度呈正相关。用酶标仪在45Onm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中浓度，或者与CUToFF值相比较，从而判定标本阴阳性。人抗肝细胞胞质1型抗体(1.Cl)EIiSa试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20

2、ml瓶2酶标试剂6mll瓶3酶标包被板12孔8条4样品稀释液6mll瓶5显色剂A液6mll瓶6显色剂B液6mll瓶7终止液6mll瓶8标准品0.5mll瓶9标准品稀释液1.5mll瓶10封板膜2张样品收集、处理及保存方法1 .血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2 .血浆：EDTA,柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3 .细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4 .组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5 .保存：如果样本收集后不及时检测，请按一

3、次用量分装，冻存于-20C。，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。样本要求1 .样本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20C。保存，但应避免反复冻融2 .不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。人抗肝细胞胞质1型抗体(1.CI)EIiSa试剂盒操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照随货说明书中图表在小试管中进行稀释。3 .加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50l,待测样品孔中先

4、加样品稀释液40l.然后再加待测样品10(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。4 .温育：用封板膜封板后置37C。温育30分钟。5 .配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸储水30倍稀释后备用6 .洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。7 .加酶：每孔加入酶标试剂50l,空白孔除外。8 .温育:操作同309 .洗涤：操作同5010 显色：每孔先加入显色剂A50l,再加入显色剂B50l,轻轻震荡混匀，37C。避光显色10分钟.11 .终止：每孔加终止液50l,终止反应（此时蓝色立转黄色）。I1.测定：以空白

5、孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。人抗肝细胞胞质1型抗体（1.CI）EIiSa试剂盒注意事项1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2 .浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3 .各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4 .请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）。5 .封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6 .底物请避光保存。7 .严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8 .所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9 .本试剂不同批号组分不得混用。10 .保存2-8C%11 .有效期：6个月