26第26章移植免疫及其免疫检测.ppt

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1、第二十六章第二十六章 移植免疫及其免疫检测移植免疫及其免疫检测 移植移植（transplantation）是指将健康细胞、组）是指将健康细胞、组织或器官从其原部位移植到自体或异体的一定部位、织或器官从其原部位移植到自体或异体的一定部位、用以替代或补偿机体所丧失的结构和（或）功能的用以替代或补偿机体所丧失的结构和（或）功能的现代医疗手段。被移植的细胞、组织或器官称移植现代医疗手段。被移植的细胞、组织或器官称移植物（物（graft），提供移植物的个体称为供体），提供移植物的个体称为供体(donor)，接受移植物的个体称为受体（接受移植物的个体称为受体（recipient）。）。自体移植自体移植 同

2、系移植同系移植 同种异体移植同种异体移植 异种移植异种移植 原位移植原位移植 根据移植部位分类根据移植部位分类 异位移植异位移植 器官移植器官移植 移植物种类分类移植物种类分类 支架组织移植支架组织移植 细胞移植细胞移植根据移植物来源分类根据移植物来源分类移植的类型移植的类型 移植名称移植名称 供者、受者关系供者、受者关系 举例举例 自体移植自体移植 同一个体同一个体 自体皮片移植自体皮片移植 同系或同基因移植同系或同基因移植 同系或同基因同系或同基因 人的单卵双生子间的器官移植人的单卵双生子间的器官移植 的个体间的个体间 同品系小鼠的皮片移植同品系小鼠的皮片移植 同种异基因移植同种异基因移植

3、 同种不同基因同种不同基因 人与人之间的肾移植人与人之间的肾移植 的个体间的个体间 不同品系小鼠间的皮片移植不同品系小鼠间的皮片移植 异种移植异种移植 异种动物间异种动物间 狗的器官移植给猩猩狗的器官移植给猩猩 猪的器官移植给狗猪的器官移植给狗 移植种类和命名移植种类和命名 第一节第一节 器官移植与移植免疫的特点器官移植与移植免疫的特点移植手术后移植物能否存活取决于：移植手术后移植物能否存活取决于：1.移植器官在移植过程中活力的保存；移植器官在移植过程中活力的保存；2.手术时血管吻合和血液循环重建的质量；手术时血管吻合和血液循环重建的质量；3.移植排斥反应的控制。移植排斥反应的控制。一、器官和

4、组织移植的一般规律一、器官和组织移植的一般规律1.移植器官或组织的抗原性异物属性移植器官或组织的抗原性异物属性2.排斥移植物的记忆特性排斥移植物的记忆特性3.负向免疫调节的必要性负向免疫调节的必要性二、二、HLA是诱导排斥反应最强的靶抗原是诱导排斥反应最强的靶抗原 主要组织相容性复合体（主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex,MHC）编码的人类白细胞抗原（）编码的人类白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLA），是不同个体间进行器官或组织），是不同个体间进行器官或组织细胞移植时发生排斥反应的主要成分，这种代表个体特异细胞移

5、植时发生排斥反应的主要成分，这种代表个体特异性的同种抗原又称组织相容性抗原性的同种抗原又称组织相容性抗原(histocompatibility)或或移植抗原移植抗原(transplantation antigen)。HLA是人体多态性最丰富的基因系统。是人体多态性最丰富的基因系统。HLA的遗传特征的遗传特征HLA分型分型要比要比ABO血型血型复杂的多，每个人不是从父母分别得到一个复杂的多，每个人不是从父母分别得到一个基因，而是得到一串基因基因，而是得到一串基因(HLA单倍型单倍型)。每人遗传到二串。每人遗传到二串“冰糖葫芦冰糖葫芦，其，其上的上的“红果红果”(基因基因)以以A、B、C、D、DR

6、、DQ和和DP为序。为序。A有有28种种红果红果(分别记为分别记为A1、A2、A3、A9.)，B有有61种种(记为记为B5、B7、B8、B12.)，DR有有24种种(记为记为DR1、DR2、DR3、DR4.)等。等。七彩七彩红果红果共有共有164种编号，如不同遗传排列的红果随机组合，按理论推种编号，如不同遗传排列的红果随机组合，按理论推算，算，“冰糖葫芦冰糖葫芦”有五亿多种变化，能组合有五亿多种变化，能组合33亿多种亿多种HLA分型分型。理论推测的理论推测的HLA分型分型数量巨大，但对一个具体的民族来说并非如此。数量巨大，但对一个具体的民族来说并非如此。在三类在三类HLA分子中，分子中，、类分

7、子是触发移植排斥反类分子是触发移植排斥反应的首要抗原，尤其是应的首要抗原，尤其是HLA-DR位点的抗原分子位点的抗原分子 HLA的识别方式的识别方式：直接识别直接识别间接识别间接识别HLA发挥双重作用发挥双重作用：介导宿主抗移植物反应介导宿主抗移植物反应(HVGR);参与移植物抗宿主反应参与移植物抗宿主反应(GVHR)。第第二节二节 HLA配型与应用分析配型与应用分析 HLA分型方法的改进和不断完善，使得分型方法的改进和不断完善，使得HLA复杂的多态性更加显现，亦推动了复杂的多态性更加显现，亦推动了HLA与群体与群体及自然选择关系的研究，更促进了人们对疾病及自然选择关系的研究，更促进了人们对疾

8、病本质的认识。本质的认识。一、HLA配型（一）血清学分型法（一）血清学分型法 应用一系列已知抗应用一系列已知抗HLA的特异性标准分的特异性标准分型血清与待测淋巴细胞混合，借助补体的型血清与待测淋巴细胞混合，借助补体的生物学作用介导细胞裂解的细胞毒试验。生物学作用介导细胞裂解的细胞毒试验。耗时长耗时长不同批号抗血清结果不同批号抗血清结果常有不同常有不同 操作简便易行操作简便易行节约试剂、结果可靠、重复性好节约试剂、结果可靠、重复性好 无需特殊设备无需特殊设备 用于用于HLA分型的微量细胞毒试验分型的微量细胞毒试验死（着染）细胞（死（着染）细胞（%）记分记分结果判断结果判断0101阴性阴性1120

9、2可疑阴性可疑阴性21504弱阳性弱阳性51806阳性阳性808强阳性强阳性0未试验或不能读数未试验或不能读数微量细胞毒试验判定标准微量细胞毒试验判定标准（二）细胞学分型法（二）细胞学分型法 以以混合淋巴细胞培养混合淋巴细胞培养（mixed lymphocyte culture,MLC）或称）或称混合淋巴细胞反应混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction,MLR）为基本技术的）为基本技术的HLA分分型法。能用本法测定的抗原称为型法。能用本法测定的抗原称为LD抗原抗原（lymphocyte defined antigen）,包括包括HLA-D、-DP。MLC分为分为单向

10、单向MLC和和双向双向MLC 将已知将已知HLA型别的分型细胞用丝裂霉素型别的分型细胞用丝裂霉素C或或X线照射预处线照射预处理，使其失去增殖能力仅作为刺激细胞；而以具有增殖能理，使其失去增殖能力仅作为刺激细胞；而以具有增殖能力的受检者外周血单个核细胞为反应细胞。两者混合培养力的受检者外周血单个核细胞为反应细胞。两者混合培养时，反应细胞可对刺激细胞发生应答而增殖，用时，反应细胞可对刺激细胞发生应答而增殖，用3H-TdR掺掺入法测定细胞增殖强度，从而判断受检细胞的入法测定细胞增殖强度，从而判断受检细胞的HLA型别。型别。根据选用的刺激细胞类型分为：根据选用的刺激细胞类型分为：1 1阴性分型法阴性分

11、型法 2 2阳性分型法阳性分型法 1.单向单向MLC 遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培养时，由于两者养时，由于两者HLA不同，能相互刺激导致对方淋不同，能相互刺激导致对方淋巴细胞增殖，故称双向巴细胞增殖，故称双向MLC。在此试验中，各自。在此试验中，各自的淋巴细胞既是刺激细胞，又是反应细胞，反应后的淋巴细胞既是刺激细胞，又是反应细胞，反应后形态上呈现的细胞转化和分裂现象，可通过形态法形态上呈现的细胞转化和分裂现象，可通过形态法计数转化细胞计数转化细胞。2.双向双向MLC本法不能判断型别，只能说明供、受体本法不能判断型别，只能说明供、受体HLA抗原

12、配合程度抗原配合程度（三）分子生物学分型法（三）分子生物学分型法 分子生物学技术的迅速发展，使得分子生物学技术的迅速发展，使得HLA的的DNA分型技术应运而生，并在开展分型技术应运而生，并在开展DNA限制性限制性片段长度多态性分析、片段长度多态性分析、DNA指纹图、等位基因特指纹图、等位基因特异性寡核苷酸杂交等基础上，引入多聚酶链反应异性寡核苷酸杂交等基础上，引入多聚酶链反应技术，使技术，使HLA分型得以在更精密的水平上进行。分型得以在更精密的水平上进行。限制性片断长度多态性限制性片断长度多态性（restriction fragment length polymorphism,RFLP）分析）

13、分析：最早建立最早建立的研究的研究HLA多态性的多态性的DNA分型技术分型技术 PCR-RFLP分型法分型法：对：对DNA片段进行体外扩片段进行体外扩增，然后再用限制性内切酶进行酶切分析，可增，然后再用限制性内切酶进行酶切分析，可使限制性长度分析的敏感度大大增加使限制性长度分析的敏感度大大增加 1.RFLP与与PCR-RFLP分型法分型法 序列特异性寡核苷酸序列特异性寡核苷酸-聚合酶链反应聚合酶链反应（PCR-sequence specific oligonucleotide,PCR-SSO）是以）是以PCR为基础，将凝胶上扩增的为基础，将凝胶上扩增的HLA基因基因DNA转移转移至硝酸纤维膜或

14、尼龙膜，进而用放射性核素或酶、至硝酸纤维膜或尼龙膜，进而用放射性核素或酶、地高辛等非放射性物质标记的寡核苷酸探针与之地高辛等非放射性物质标记的寡核苷酸探针与之进行杂交，从而对扩增产物作出进行杂交，从而对扩增产物作出HLA型别判断。型别判断。2.PCR-SSO分型法分型法 分类：分类：斑点或印渍法斑点或印渍法 反向斑点或印渍法反向斑点或印渍法PCR-SSO是是类类HLA分型应用最广泛的方法，分型应用最广泛的方法，能够鉴定所有已知序列的能够鉴定所有已知序列的HLA-DR、DQ、DP等位基因等位基因是近年发展起来的一项新技术是近年发展起来的一项新技术,将其与将其与PCR-SSO结结合应用于合应用于H

15、LA分型，可使分型趋于规模化和自动分型，可使分型趋于规模化和自动化，尤其在化，尤其在HLA多态性和疾病遗传背景分析等方多态性和疾病遗传背景分析等方面更具优势。面更具优势。HLA的基因芯片分型法，实际上是的基因芯片分型法，实际上是PCR-SSO反向斑点或印渍法的微型化。目前，基反向斑点或印渍法的微型化。目前，基因芯片在因芯片在HLA分型领域的应用尚属起步阶段。分型领域的应用尚属起步阶段。基因芯片基因芯片(gene chip)原理：原理：应用设计的一套应用设计的一套HLA等位基因的序列等位基因的序列特异性引特异性引物（物（sequence specific primer,SSP）,对待测对待测DN

16、A进行进行PCR扩增，从而获得扩增，从而获得HLA型别特异性的扩增产物型别特异性的扩增产物3.PCR-SSP分型法分型法 HLA基因扩增的特异性包括：基因扩增的特异性包括：座位特异性（座位特异性（locus-specific），如），如HLA-A、B、-DRB1等；等；组特异性（组特异性（group-specific），如），如DRB1-01、DRB1-02等；等；等位基因特异性（等位基因特异性（allele-specific），如），如DRB1*0401、DRB1*0402等。等。4.PCR-SSCP分型法分型法 单链构象特异性聚合酶链反应单链构象特异性聚合酶链反应（PCR-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP）是）是以待测基因以待测基因PCR扩增为基础，对扩增的单链扩增为基础，对扩增的单链DNA（ssDNA）的）的HLA分型方法。分型方法。原理：原理：对对ssDNA进行无变性剂的聚丙烯酰凝胶电泳进行无变性剂的聚丙烯酰凝胶电泳时，因其序列的差异可形成不同的空间构象而导致时，因其序列的差异可形成不同的空间构象而导致电泳迁移率的