血清酶类测定精要.ppt

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1、第一节第一节 概述概述一、一、最容易释放入血的是胞质中游离的酶，而在最容易释放入血的是胞质中游离的酶，而在细胞亚显微结构中的酶则较难溢出细胞亚显微结构中的酶则较难溢出 酶的释放速度大致与酶的分子量成反比酶的释放速度大致与酶的分子量成反比 一般以血中酶的半寿期来代表酶从血中清除快慢一般以血中酶的半寿期来代表酶从血中清除快慢 （三）酶合成异常：（三）酶合成异常：对于血浆特异酶，细胞内酶合成下降对于血浆特异酶，细胞内酶合成下降是引起血中酶变化的重要因素是引起血中酶变化的重要因素 血清酶符号来源丙氨酸氨基转移酶门冬氨酸氨基转移酶肌酸激酶乳酸脱氢酶碱性磷酸酶酸性磷酸酶-谷氨酰转移酶5-核苷酸酶单胺氧化酶

2、-淀粉酶脂肪酶谷氨酸脱氢酶异柠檬酸脱氢酶胆碱酯酶山梨醇脱氢酶鸟氨酸氨基甲酰转移酶卵磷脂胆固醇酰基转移酶ALTASTCKLDHALPACP-GT5-NTMAOAMSLPSGLDHICDCHESDHOCTLCAT肝、肾、心心、肝、骨骼肌骨骼肌、心、脑心、肾、骨骼肌、肝、肺小肠、胎盘、肝、肾前列腺、红细胞、血小板肝、胆、肾、小肠肝、胆道肝、肾、脑胰、唾液腺胰肝肝、胎盘、心肝肝肝肝反映肝细胞实质病变：反映肝细胞实质病变：ALT、AST反映肝细胞合成功能：反映肝细胞合成功能：ChE、LCAT反映胆道阻塞病变：反映胆道阻塞病变：ALP、GGT反映肝纤维化病变：反映肝纤维化病变：MAOCK-MB，LDH1，

3、ASTALPAMY，LPSAST，CK，LDH，ALD同工酶同工酶ACP第二节第二节 临床常用血清酶活性测定临床常用血清酶活性测定 显升高。如红细胞显升高。如红细胞内的内的LDLD、ASTAST和和ALTALT活性分别较血清中高活性分别较血清中高150150、1515和和7 7倍左倍左右，故测定这些酶时，样品应避免溶血。右，故测定这些酶时，样品应避免溶血。静脉采血后，必须在静脉采血后，必须在1-2h1-2h内及时离心，将血清与血内及时离心，将血清与血细胞、血凝块分离，以免血细胞中的酶通过细胞膜细胞、血凝块分离，以免血细胞中的酶通过细胞膜进入血清而引起误差。进入血清而引起误差。大多数抗凝剂都在一

4、定程度上影响酶活性，大多数抗凝剂都在一定程度上影响酶活性，临床上临床上除非测定与凝血或纤溶有关的酶，一般都应以血清除非测定与凝血或纤溶有关的酶，一般都应以血清作为首选测定标本。作为首选测定标本。为防止酶蛋白变性为防止酶蛋白变性 ，一般至少应在血清分离后的，一般至少应在血清分离后的当天进行测定，否则应放冰箱冷藏当天进行测定，否则应放冰箱冷藏 有些酶如有些酶如LDLD及其同工酶及其同工酶(LD4(LD4和和LD5)LD5)在低温在低温(特别是特别是2020冰冻冰冻)可引起不可逆性失活，反而不如室温稳定可引起不可逆性失活，反而不如室温稳定（“冷变性冷变性”）。）。氨基转移酶氨基转移酶活性活性测定测定

5、氨基转移酶又称转氨酶，在机体内多达氨基转移酶又称转氨酶，在机体内多达6060余种，广泛存在于肝余种，广泛存在于肝脏、心肌、骨骼肌、肾、脑、胰、肺、白细胞、红细胞中。脏、心肌、骨骼肌、肾、脑、胰、肺、白细胞、红细胞中。其中以丙氨酸氨基转移酶其中以丙氨酸氨基转移酶(ALT(ALT或或GPT)GPT)和天门冬氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶(AST(AST或或GOT)GOT)两种最为重要，它们催化机体内氨基酸的转氨基反两种最为重要，它们催化机体内氨基酸的转氨基反应：应：ALTL-丙氨酸丙氨酸+-酮戊二酸酮戊二酸 丙酮酸丙酮酸+L-谷氨酸谷氨酸 ASTL-天门冬氨酸天门冬氨酸+-酮戊二酸酮戊二酸

6、草酰乙酸草酰乙酸+L-谷氨酸谷氨酸 A-NH2+B A+B-NH2转氨酶转氨酶 测定方法测定方法 一、速率法（连续监测法一、速率法（连续监测法 ）n原理原理 NADH NADH在在340nm340nm处有特征吸收峰，连续监测处有特征吸收峰，连续监测NADHNADH消耗引起的消耗引起的340nm340nm吸光度变化吸光度变化,根据根据340nm340nm处吸光度下降速率（处吸光度下降速率（A/minA/min）计算计算ALTALT活性活性 丙酮酸谷氨酸酮戊二酸丙氨酸 LLLALTNADLHNADHLLD乳酸丙酮酸参考方法参考方法血清血清丙氨酸丙氨酸氨基转移酶氨基转移酶（ALTALT）活性）活性测

7、定测定1 1.该该ALTALT测定法中存在两个消耗测定法中存在两个消耗NADHNADH的副反应的副反应n评价评价双试剂法双试剂法：血清与缺少：血清与缺少-酮戊二酸的底物溶液混合，酮戊二酸的底物溶液混合，3737保温保温5min5min，使样品中所含内源性，使样品中所含内源性-酮酸（如丙酮酸）引起的副反应进酮酸（如丙酮酸）引起的副反应进行完毕。然后，加入行完毕。然后，加入-酮戊二酸启动酮戊二酸启动ALTALT的催化反应，在波长的催化反应，在波长340nm340nm处连续监测吸光度下降速率。根据线性反应期吸光度下降速处连续监测吸光度下降速率。根据线性反应期吸光度下降速率率(-(-A Amin)mi

8、n)，计算出，计算出ALTALT活力单位。活力单位。（ALTALT测定的首选方法）测定的首选方法）血清中存在的游离血清中存在的游离-酮酸（如丙酮酸）和增多的谷氨酸酮酸（如丙酮酸）和增多的谷氨酸脱氢酶（脱氢酶（GLDHGLDH）能消耗）能消耗NADHNADH，使测定值偏高。，使测定值偏高。2.2.在在IFCCIFCC推荐的试剂盒中含有推荐的试剂盒中含有P5PP5P，这是转氨酶的辅基，这是转氨酶的辅基，能使血清中能使血清中ALTALT发挥最大活性。发挥最大活性。（二）（二）定时定时比色法比色法（两点法）（两点法）赖氏赖氏比色法比色法n原理：原理：u 选择在选择在500-520nm500-520nm

9、处检测，丙酮酸苯腙的显色强度约为处检测，丙酮酸苯腙的显色强度约为-酮戊二酸苯腙的酮戊二酸苯腙的3 3倍倍底物底物-酮戊二酸酮戊二酸及及2,4-2,4-二硝基苯肼二硝基苯肼的浓度的浓度ALTALT测定不是测定不是在最佳条件下进行，反应中丙酮酸生成量与在最佳条件下进行，反应中丙酮酸生成量与ALTALT活性不能呈现良好的线性关系活性不能呈现良好的线性关系(这是赖氏法的最大缺陷这是赖氏法的最大缺陷)，其标准曲线不呈直线而，其标准曲线不呈直线而为抛物线。为抛物线。2,4-2,4-二硝二硝基苯肼基苯肼丙酮酸苯腙丙酮酸苯腙(在碱性条件下呈红棕色在碱性条件下呈红棕色)-酮戊二酸苯腙酮戊二酸苯腙(在碱性条件下呈

10、红棕色在碱性条件下呈红棕色)丙氨酸丙氨酸 +-+-酮戊二酸酮戊二酸 丙酮酸丙酮酸 +谷氨酸谷氨酸 ALT37pH7.4n活性单位活性单位 赖氏法以赖氏法以卡门单位卡门单位报告测定结果报告测定结果 卡门单位定义：血清卡门单位定义：血清1ml1ml，反应液总体积，反应液总体积3ml3ml，2525，波，波长长340nm340nm，比色杯光径，比色杯光径1.0cm1.0cm，每分钟吸光度下降，每分钟吸光度下降0.001A0.001A为一为一个单位（相当于每升反应体系中个单位（相当于每升反应体系中0.16080.1608mol NADHmol NADH被氧化）。被氧化）。n方法评价方法评价 1.1.操

11、作简便，不需要紫外分光光度计，易于普及，操作简便，不需要紫外分光光度计，易于普及，所用的所用的酶活性单位通过卡门氏分光光度速率法矫正酶活性单位通过卡门氏分光光度速率法矫正故卫生故卫生部临检中心建议国内无条件使用连续监测法的单位使用部临检中心建议国内无条件使用连续监测法的单位使用赖氏法。赖氏法。底物底物-酮戊二酸酮戊二酸及及2 2，4-4-二硝基苯肼二硝基苯肼的浓度，造成的浓度，造成ALTALT测定不是在最佳条件下进行，测定不是在最佳条件下进行，反应中丙酮酸生成量与反应中丙酮酸生成量与ALTALT活性不能呈现良好的线性关系，活性不能呈现良好的线性关系，这是赖氏法的最大缺陷这是赖氏法的最大缺陷。参

12、考区间参考区间 赖氏比色法：赖氏比色法：5 52525卡门单位（反应温度为卡门单位（反应温度为3737）速率法：速率法：男性：男性：5 540 U/L40 U/L（反应温度为（反应温度为3737，试剂不含，试剂不含P5PP5P）女性：女性：5 535 U/L35 U/L（反应温度为（反应温度为3737，试剂不含，试剂不含P5PP5P）ALTALT广泛分布于全身各组织器官，尤以广泛分布于全身各组织器官，尤以肝细胞肝细胞中含量最中含量最多，其次是肾脏多，其次是肾脏、心脏心脏及骨骼肌及骨骼肌，通常只有极少量释放入，通常只有极少量释放入血液，所以血清中此酶的活力很低，当这些组织病变时，血液，所以血清中

13、此酶的活力很低，当这些组织病变时，细胞坏死或通透性增加，细胞内酶大量释放入血，使血清细胞坏死或通透性增加，细胞内酶大量释放入血，使血清中该酶活力显著增高中该酶活力显著增高。临床意义临床意义(1)(1)肝胆疾病肝胆疾病：急性病毒性肝炎、慢性活动型肝炎、脂肪肝、肝癌、急性病毒性肝炎、慢性活动型肝炎、脂肪肝、肝癌、肝硬变活动期、中毒性肝炎、胆结石、胆管炎和胆囊炎等。肝硬变活动期、中毒性肝炎、胆结石、胆管炎和胆囊炎等。(2)(2)心血管疾病心血管疾病：急性心肌梗死、急性心肌炎、急性心力衰竭、脑急性心肌梗死、急性心肌炎、急性心力衰竭、脑出血等。出血等。(3)(3)骨骼肌疾病骨骼肌疾病：多发性肌炎、进行性

14、肌营养不良等。多发性肌炎、进行性肌营养不良等。（4 4）一些药物和毒物可引起一些药物和毒物可引起ALTALT活性升高活性升高：如氯丙嗪、异菸肼、如氯丙嗪、异菸肼、苯巴比妥、奎宁、水杨酸制剂及酒精、铅、汞、四氯化碳或有机磷等苯巴比妥、奎宁、水杨酸制剂及酒精、铅、汞、四氯化碳或有机磷等 ALTALT在肝脏疾病中的应用价值在肝脏疾病中的应用价值ALTALT急性明显升高，常达急性明显升高，常达200U200U以上，病情较重者可达以上，病情较重者可达400-600U400-600U以上，甚至以上，甚至更高，个别重型病人甚至可超过更高，个别重型病人甚至可超过1000U1000U。ALTALT越高，肝脏细胞

15、损害越严重。越高，肝脏细胞损害越严重。慢性活动性肝炎：慢性活动性肝炎：ALTALT持续轻度升高几十或持续轻度升高几十或100U100U以上（以上（100100200U200U）u慢性肝炎慢性肝炎u 急性肝炎急性肝炎u重型肝炎重型肝炎 由于肝细胞发生大量变性，坏死，使由于肝细胞发生大量变性，坏死，使ALTALT大量进入血液，因此，大量进入血液，因此，ALTALT迅迅速升高，高达数百速升高，高达数百1000U1000U以上，如果以上，如果ALTALT含量越高，上升越快，说明含量越高，上升越快，说明肝细胞坏死严重，病情进展也越快。肝细胞坏死严重，病情进展也越快。当病情发展到一定的严重程度，肝细胞大量

16、坏死，肝脏生产当病情发展到一定的严重程度，肝细胞大量坏死，肝脏生产ALTALT的能力的能力丧失，这时血液中的丧失，这时血液中的ALTALT降低，但是黄疸却持续升高（胆红素上升），降低，但是黄疸却持续升高（胆红素上升），这种现象即所谓这种现象即所谓“酶胆分离酶胆分离”，往往提示病情正在恶化，常是肝坏死征，往往提示病情正在恶化，常是肝坏死征兆。兆。ALTALT增高程度与肝硬化的活动度和肝组织炎症改变及肝细胞损害程增高程度与肝硬化的活动度和肝组织炎症改变及肝细胞损害程度相一致。对度相一致。对ALTALT进行监测有助于对肝硬化病情的判断。若是静止进行监测有助于对肝硬化病情的判断。若是静止性肝硬化，则性肝硬化，则ALTALT维持正常维持正常 ；肝硬化病人的转氨酶出现较大幅度；肝硬化病人的转氨酶出现较大幅度的升高，提示病情可能发展成活动性，须引起警惕。的升高，提示病情可能发展成活动性，须引起警惕。u肝硬化肝硬化u肝癌肝癌 80%80%90%90%肝细胞都是在肝硬化基础上发生的，因此，在早期，肝细胞都是在肝硬化基础上发生的，因此，在早期，ALTALT是否增高是否增高主要决定于肝硬化的活动程度。若是静