牙膏中霉菌和酵母菌总数检验方法.docx

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1、附件16牙膏中霉菌和酵母菌检验方法MoldsandYeastsCountinToothpaste1范围本规范规定了牙膏中霉菌和酵母菌的检验方法。本规范适用于牙膏中霉菌和酵母菌的测定。2定义霉菌和酵母菌数测定Moldsandyeastscount牙膏检样经过处理，在一定条件下培养后，Ig检样中形成的霉菌和酵母菌总数，藉以判明牙膏被霉菌和酵母菌污染程度及其般卫生状况。本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎红培养基上，置28C+2C培养5d,计算所生长的霉菌和酵母菌数。3仪器和设备3.1 恒温培养箱：28C2Co3.2 振荡器。3.3 三角瓶：250mL。3.4 试管：18mmxl50mm

2、03.5 灭菌平皿：直径90mm。3.6 无菌吸管：1mL（具0.0ImL刻度）、IomL（具0.1mL刻度）或者移液器及吸头。3.7 量筒：200mLo3.8 酒精灯。3.9 高压灭菌器。3.10 恒温水浴箱。4培养基和试剂4.1 SCDLP液体培养基见总则中3.1。4.2 虎红（孟加拉红）培养基成分：蛋白陈葡萄糖10g磷酸二氢钾1g硫酸镁（无水）0.5g琼脂20g1/3000虎红溶液100mL（四氯四碘荧光素）蒸储水加至100OmL氯霉素100mg制法：将上述各成分（除虎红外）加入蒸储水中溶解后，再加入虎红溶液。分装后，121高压灭菌20min,另用少量乙醇溶解氯霉素，溶解过滤后加入培养基

3、中，若无氯霉素，使用时每1000mL加链霉素30mg。5操作步骤5.1 样品稀释牙膏样品的稀释分别见牙膏中菌落总数检验方法5.1。5.2 取5.1的样品稀释液各2mL,分别注入2个灭菌平皿内，每皿ImL,注入融化并冷却至44C48C的虎红培养基，充分摇匀。凝固后，翻转平板，置28C2C培养5d,观察并记录。同时吸取ImL空白稀释液加入灭菌空平皿中，加入约15mL虎红培养基，待琼脂凝固后，翻转平皿，置28C2C培养箱内培养5d,为空白对照。5.3 计算方法：先点计每个平板上生长的霉菌和酵母菌菌落数，求出每个稀释度的平均菌落数。判定结果时,应选取菌落数在5CFU50CFU范围之内的平皿计数,乘以稀释倍数后，即为每g检样中所含的霉菌和酵母菌总数。其他范围内的菌落数报告应参照菌落总数的报告方法报告之。5.4 每g牙膏含霉菌和酵母菌总数以CFU/g表示。